兔S100A6基因表达载体构建、鉴定、转染及其对神经细胞增殖影响的研究

发布时间：2020-06-23 12:01

【摘要】：目的:利用分子生物学方法获取兔的Soluble-100A6(S100A6)蛋白的基因并构建其质粒表达载体,采用脂质体介导转染技术分别将目的基因表达载体和空载体转染入雪旺细胞(Schwann Cells,SCs)中,鉴定兔S100A6基因表达载体,研究S100A6蛋白在SCs中的表达情况及其对SCs增殖的影响。方法:取家兔坐骨神经,提取SCs并培养;构建S100A6基因表达载体质粒,对质粒进行相关验证、鉴定,采用脂质体介导转染技术分别将S100A6蛋白c DNA质粒表达载体与空载质粒转染入SCs中,即:A组:S100A6c DNA+SCs;B组:空白载体+SCs。转染成功后采用蛋白印迹法(Western Blot检测S100A6蛋白在SCs中的表达,分析两组S100A6蛋白表达量的变化;同时,采用免疫细胞化学检测两组SCs增殖情况。结果:1、经凝胶电泳及PIRES2-EGFP-S100A6双切酶验证,初步鉴定S100A6质粒构建成功;表达载体质粒经生物公司测序、与标准序列对比,证实S100A6质粒载体构建成功。2、蛋白印迹法(Western Blot)检测S100A6过表达组SCs中S100A6蛋白表达量明显高于对照组;3、免疫细胞化学检测过表达组增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)蛋白阳性率(38.4%±4.8%明显高于对照组(8.7%±1.4%),差异有统计学意义(t=13.44,P0.001)。结论:兔S100A6蛋白基因表达载体构建成功,转染SCs能够提高细胞中S100A6蛋白表达量,S100A6蛋白可以促进SCs处于增殖活跃状态。
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R78;R688
【图文】：

14内蒙古医科大学硕士研究生学位论文（2019）五、结果5.1 S100A6 电泳及双酶切验证结果分析：S100A6 基因凝胶电泳及 PIRES2-EGFP-S100A6 双切酶验证，均切出406bp 条带（图 2,3,4），大小符合理论预期，初步鉴定 S100A6 质粒构建成功；质粒送生物公司测序结果与目的基因序列完全一致，测序结果经 NCBI 的 Blast 转件及 CLSequence Viewer 4 软件与标准序列对比，证实构建的 S100A6 重组质粒载体与标准的S100A6 基因序列相符（图 1,5,6），进一步证实 S100A6 质粒载体构建成功。5.1.1 目的基因 S100A6 基因完整序列

100A6基因琼脂糖凝胶电泳

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本文编号：2727300