不同发育阶段人牙髓组织VEGF及其受体表达的实验研究
发布时间：2020-07-04 16:07
【摘要】： 目的 1.比较劈牙取髓和脱钙制作牙体-牙髓联合切片两种方法,在牙髓的实验研究方面的优缺点。 2.应用免疫组化研究不同发育阶段人牙髓VEGF,Flt-1,Flk-1的表达及受体的相关性。 3.应用RT-PCR从基因水平研究不同发育阶段人牙髓VEGF、Flt-1、Flk-1的基因表达及受体的相关性。 方法 1.制备牙髓组织切片及牙体-牙髓联合切片,HE染色。通过制备程序、组织学观察等分析两种方法的优缺点。 2.选取临床上因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙,分为两组:Ⅰ根尖孔未闭合,Ⅱ根尖孔完全闭合。采用实验一筛选的方法制备切片,进行VEGF,Flt-1,Flk-1免疫组化染色,通过Image-Pro Plus 6.0和SPSS17.0软件行分析统计。 3.提取不同发育阶段人牙髓组织总RNA,采用RT-PCR技术从基因水平初步探究VEGF及其受体在牙体发育成熟中的作用机制,实验分组及测定指标同2。 结果 1.劈牙取髓操作简便快捷,组织固定、脱水等容易掌握,但不易保证组织完整性,牙髓各部不易区分,适用于需要新鲜牙髓的实验研究。脱钙制作牙体-牙髓联合切片工序较繁琐,脱钙、组织固定、脱水等不易掌握,但牙髓保存完整,牙髓各部定位明确,适用于牙髓的组织学观察研究。 2.通过免疫组织化学染色观察,发现在年轻恒牙中VEGF,Flk-1的表达高于成熟恒牙且以根尖部最为显著(P0.05);Flt-1在年轻恒牙中的表达低于成熟恒牙(P0.05);Flt-1,Flk-1呈显著负相关性表达(P0.01)。 3.琼脂糖凝胶电泳显示:VEGF、Flt-1、Flk-1的mRNA扩增对应片段长度为145bp、169bp、162bp。通过RT-PCR检测,得出年轻恒牙VEGF及其受体Flt-1、Flk-1的表达分别是成熟恒牙的1.7倍及0.6倍、1.5倍(P0.05),与免疫组化所得的结果基本一致。 结论 1.牙体脱钙制作牙体-牙髓联合切片能较大程度保全牙髓,实验结果客观真实,在需对牙髓各部分进行定性和定量分析研究中值得推荐。 2.VEGF, Flt-1,Flk-1在人正常牙髓组织中,随着根尖孔的闭合呈现不同特征表达,参与了牙髓的发育和成熟。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R781.05
【图文】：
0.01mol/L PH=7.4 磷酸盐缓冲液 （北京中杉试剂公司，粉剂，ZLI-9063）10%中性福尔马林（40%甲醛 100ml +蒸馏水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、实验方法1、标本的固定、包埋和切片制作（1）经由患者同意，牙体拔除后去尽牙周软组织，生理盐水洗净：Ⅰ组：牙体于无菌纱布台面劈开，探针小心剥离，尽量确保牙髓成条取出。剔净牙髓上硬组织碎片，PBS 漂洗，10%中性福尔马林固定 3h。Ⅱ组：离体牙于 10%中性福尔马林固定 1d，流水冲洗，金刚砂沿牙体外形均匀磨除至透见髓腔形态，牙薄片厚约 2mm（图 1a-b）。牙片再固定 1d，流水冲洗，37°C 培养箱中进口脱钙液脱钙，待牙体软至扩大针可无阻力穿通时取出。
0.01mol/L PH=7.4 磷酸盐缓冲液 （北京中杉试剂公司，粉剂，ZLI-9063）10%中性福尔马林（40%甲醛 100ml +蒸馏水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、实验方法1、标本的固定、包埋和切片制作（1）经由患者同意，牙体拔除后去尽牙周软组织，生理盐水洗净：Ⅰ组：牙体于无菌纱布台面劈开，探针小心剥离，尽量确保牙髓成条取出。剔净牙髓上硬组织碎片，PBS 漂洗，10%中性福尔马林固定 3h。Ⅱ组：离体牙于 10%中性福尔马林固定 1d，流水冲洗，金刚砂沿牙体外形均匀磨除至透见髓腔形态，牙薄片厚约 2mm（图 1a-b）。牙片再固定 1d，流水冲洗，37°C 培养箱中进口脱钙液脱钙，待牙体软至扩大针可无阻力穿通时取出。
本文编号：2741290
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R781.05
【图文】：
0.01mol/L PH=7.4 磷酸盐缓冲液 （北京中杉试剂公司，粉剂，ZLI-9063）10%中性福尔马林（40%甲醛 100ml +蒸馏水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、实验方法1、标本的固定、包埋和切片制作（1）经由患者同意，牙体拔除后去尽牙周软组织，生理盐水洗净：Ⅰ组：牙体于无菌纱布台面劈开，探针小心剥离，尽量确保牙髓成条取出。剔净牙髓上硬组织碎片，PBS 漂洗，10%中性福尔马林固定 3h。Ⅱ组：离体牙于 10%中性福尔马林固定 1d，流水冲洗，金刚砂沿牙体外形均匀磨除至透见髓腔形态，牙薄片厚约 2mm（图 1a-b）。牙片再固定 1d，流水冲洗，37°C 培养箱中进口脱钙液脱钙，待牙体软至扩大针可无阻力穿通时取出。
0.01mol/L PH=7.4 磷酸盐缓冲液 （北京中杉试剂公司，粉剂，ZLI-9063）10%中性福尔马林（40%甲醛 100ml +蒸馏水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、实验方法1、标本的固定、包埋和切片制作（1）经由患者同意，牙体拔除后去尽牙周软组织，生理盐水洗净：Ⅰ组：牙体于无菌纱布台面劈开，探针小心剥离，尽量确保牙髓成条取出。剔净牙髓上硬组织碎片，PBS 漂洗，10%中性福尔马林固定 3h。Ⅱ组：离体牙于 10%中性福尔马林固定 1d，流水冲洗，金刚砂沿牙体外形均匀磨除至透见髓腔形态，牙薄片厚约 2mm（图 1a-b）。牙片再固定 1d，流水冲洗，37°C 培养箱中进口脱钙液脱钙，待牙体软至扩大针可无阻力穿通时取出。
【引证文献】
相关期刊论文 前1条
1 关为群;陈雅瑜;;辛伐他汀对人正常牙髓细胞和脂多糖诱导的人牙髓细胞增殖的影响[J];中国医院药学杂志;2013年07期
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1 陈雅瑜;辛伐他汀对人牙髓细胞的体外作用及机制研究[D];福建医科大学;2013年
本文编号：2741290
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/2741290.html
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