束缚应激和Pg-LPS对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

发布时间：2020-07-13 09:53

【摘要】： 目的：检测束缚应激和牙龈卟啉单胞菌内毒素(Pg-LPS)对大鼠腹腔巨噬细胞释放NO、TNF-α、H_2O_2及IL-Iβ、IL-2、TL-6、IL-10等细胞因子的影响，了解束缚应激和Pg-LPS对大鼠腹腔巨噬细胞凋亡情况的影响，初步探讨应激影响牙周疾病的机制。 方法：(1)第一部分：采用束缚应激方式，将SPF级雄性SD大鼠随机分为无应激组和应激组，于应激结束时常规收集腹腔液，用RPMI-1640培养液培养巨噬细胞，用贴壁法纯化巨噬细胞，并将细胞分为四组：正常对照组、Pg-LPS组、应激组和应激+Pg-LPS组，其中正常对照组和应激组用RPMI-1640培养液继续培养，Pg-LPS组和应激+Pg-LPS组用RPMI-1640培养液+1μg／mlPg-LPS继续培养，24小时后分别收集上清，测定上清液中NO、H_2O_2、TNF-α水平。 (2)第二部分：采用束缚应激方式，将SPF级雄性SD大鼠随机分为无应激组、1天应激组及12天应激组，于应激结束时常规收集腹腔液，巨噬细胞培养及纯化等步骤同第一部分，细胞分为无应激组、1天应激组及12天应激组，均用RPMI-1640培养液+1μg／ml Pg-LPS继续培养，24小时后分别收集上清，用Luminex~(100)检测仪测定上清液中IL-Iβ、IL-2、IL-6、IL-10等的水平。 (3)第三部分：采用束缚应激方式，将SPF级雄性SD大鼠随机分为无应激组和应激组，于应激结束时处死动物、收集腹腔液、培养及纯化巨噬细胞等步骤同第一部分，巨噬细胞分为六组，分别继续用RPMI-1640培养液，RPMI-1640培养液+0.01μg／mlPg-LPS，RPMT-1640培养液+1μg／mlPg-LPS继续培养。于24小时后收集细胞爬片，采用荧光染色法、原位末端标记法(TUNEL)观察巨噬细胞的凋亡情况。 结果：第一部分：应激组大鼠体重明显减轻(p＜0.05)。应激组大鼠腹腔巨噬细胞总量减少(p＜0.05)。Pg-LPS组NO水平比正常对照组显著增加(p＜0.05)，单纯应激组H_2O_2水平比正常对照组显著增加(p＜0.05)，应激+Pg-LPS组NO、H_2O_2、TNF-α水平比正常对照组显著增加(p＜0.05)。 第二部分：1天应激组各细胞因子水平与无应激组比较均无显著差异。12天应激组的IL-1β水平比无应激组显著增加(p＜0.05)、IL-6水平比无应激组显著降低(p＜0.05)；IL-2水平比1天应激组显著降低(p＜0.05)。IL-10在各组间差异无统计学意义(p＞0.05)。 第三部分：无应激、1μg／mlPg-LPS组及应激、1μg／mlPg-LPS组巨噬细胞的凋亡率较正常对照组明显提高(p＜0.05)，应激、1μg／mlPg-LPS组巨噬细胞的凋亡率较无应激、1μg／mlPg-LPS明显提高(p＜0.05)。 结论：(1)慢性束缚应激可引起大鼠体重减轻、腹腔巨噬细胞总量减少，慢性束缚应激和Pg-LPS可引起大鼠腹腔巨噬细胞所释放的NO、TNF-α、H_2O_2水平的改变；(2)1μg／mlPg-LPS刺激下，急性应激未引起大鼠腹腔巨噬细胞所释放的各细胞因子水平的改变，而慢性束缚应激可引起IL-Iβ、IL-2、IL-6等细胞因子水平的改变。(3)1μg／ml Pg-LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞凋亡，束缚应激能加重这种异常。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R781.4
【图文】：

应激组、无/公LPS刺激的巨噬细胞荧光染色结果(荧光显微镜X400):

无应激组、无Z梦LPS刺激的巨噬细胞荧光染色结果(荧光显微镜x400):

应激组、0.01以g/mll公~LPS刺激的巨噬细胞荧光染色结果

【参考文献】

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本文编号：2753301