GPNMB过表达对牙髓干细胞成牙本质向分化的影响

发布时间：2020-09-08 11:01

　　 目的:牙髓干细胞在牙髓组织中能保持干细胞未分化状态,在经矿化/成牙本质向诱导后牙髓干细胞可以向成牙本质细胞方向分化。目前众多研究表明,在体外培养下不同的诱导因子,可以作为调控器通过相关的信号通路在一定程度上参与调控牙髓干细胞成牙本质向分化。本研究用非转移性黑色素瘤糖蛋白B(GPNMB)慢病毒转染人牙髓干细胞(hDPSCs)观察GPNMB对hDPSCs成牙本质向分化的影响。方法:1.用组织块酶消化联合法,从因正畸或阻生齿需要拔除的健康恒牙的牙髓中提取牙髓细胞,细胞经过挑单克隆、有限稀释法扩大培养。通过对细胞进行成脂、矿化/成牙本质向诱导,经油红0染色检测细胞形成脂肪滴具有成脂能力,茜素红染色检测细胞形成矿化结节具有矿化/成牙本质向分化的能力;蛋白免疫印记法检测细胞DSPP、DMP1表达,RT-PCR检测DSPP、DMP1的mRNA表达确定提取的细胞为牙髓干细胞,建立实验细胞模型。同时通过蛋白免疫印记法、RT-PCR检测GPNMB的表达。2.GPNMB慢病毒转染牙髓干细胞,通过蛋白免疫印记法检测细胞DSPP、DMP1、GPNMB表达。3.将GPNMB慢病毒转染后的牙髓干细胞分为对照组及实验组,经矿化/成牙本质向诱导,用碱性磷酸酶染色法及RT-PCR比较两组碱性磷酸酶的活性,DSPP、DMP1、GPNMB的mRNA表达。结果:1.经分离扩大培养的细胞具有牙髓干细胞多向分化的能力,在矿化/成牙本质向诱导的过程中检测到DSPP、DMP1特异性蛋白及mRNA的表达,表达量随时间的增长而增强。2.在牙髓干细胞矿化/成牙本质向诱导的过程中检测到GPNMB蛋白及mRNA的表达,表达随诱导时间的延长而增强。3.M0I=50时GPNMB慢病毒转染牙髓干细胞效果较好,转染后牙髓干细胞形态无明显改变,蛋白免疫印记法检测GPNMB表达较对照组增强。4.GPNMB慢病毒转染后,经矿化/成牙本质向诱导,实验组碱性磷酸酶活性及DSPP、DMP1、GPNMB的mRNA表达比对照组增强。结论:利用GPNMB慢病毒转染牙髓干细胞经矿化/成牙本质向诱导后DSPP、DMP1的mRNA表达呈上调趋势,说明GPNMB在牙髓干细胞成牙本质向分化的过程中起正向调节作用。
【学位单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R78
【部分图文】：

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图３茜素红染色后矿化结节的形成（Ｘ２０）逡逑ｕｒｅ邋３邋Ｔｈｅ邋ｆｏｒｍａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄ邋ｎｏｄｕｌｅｓ邋ａｌｉｚａｒｉｎ邋ｒｅｄ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋（＊碱性磷酸酶３生逡逑１５０－１逡逑１００－逡逑ｐ＆逦■ｉｉ逦ｉｉｉｉ逡逑■■丨■逦：：：￥：：：：＞：：：：：：：￥：逦￥：：：：邋＞＞：：：；逡逑ＷｖｒＷｒ＇ｒＷｘ逦；＊＞ｒ＊ｒ＊ｒ＊ｒ＂ｉ＊ｒ＊＞ｒ＊Ａ逦ｉｉｖ逡逑0邋Ｉ邋杜ＳＳｐ丨ｇ；｜逦ｔ：；：；：；：ａ：；ｉ；ｉ；：；Ｓ；ｌ邋Ｉｓｇｇｇｇｊ逦谇`幔慑义狭铄澹掊危迹樱掊义鲜奔溴义

本文编号：2814099