溶菌酶联合甘氨酸引导无定形磷酸钙仿生矿化脱矿牙釉质

发布时间：2020-09-30 10:51

　　目的:龋病是最常见的口腔疾病,也是当今世界共同关注的公共卫生问题。通过再矿化的方法来控制龋病的进展,并恢复牙齿的美观、强度和功能是现代口腔医学的一个重要目标。实现羟基磷灰石晶体定向有序再矿化,从而在脱矿牙釉质表面恢复与天然釉质相似的结构形态和力学性能,是当今仿生矿化领域的热点问题。为了模拟天然釉质(釉原蛋白)的生物矿化过程,本研究采用溶菌酶(LZM)模拟釉原蛋白稳定非晶态磷酸钙(ACP),形成LZM/ACP纳米粒子。利用次氯酸钠(NaClO)降解溶菌酶来模拟金属基质蛋白酶在体内分解釉原,生成ACP纳米粒子。在甘氨酸(Gly)的引导下,ACP纳米粒子可以有序排列,由非晶态转变磷灰石晶体,最终形成了类似于天然釉质的定向有序的棒状羟基磷灰石晶体。方法:1、常温下依次把CaCl_2·2H_2O和K_2HPO_4加入到溶菌酶(LZM)溶液中,利用LZM稳定ACP形成LZM-ACP纳米微粒,利用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)来表征微粒形态特征,选区电子衍射(Selected Area Electron Diffraction,SAED)进行晶体样品的形貌特征与晶体学性质的原位分析。2、收集无龋无裂纹的下颌垂直阻生齿制备釉质切片,随机分为4组(酸蚀牙釉质组A,LZM-ACP处理组B,LZM-ACP+Gly处理组C,天然釉质组D,每组各10个样品)。A、B、C使用气枪吹干,37%磷酸凝胶酸蚀釉质30s、大量去离子水冲洗去净磷酸、气枪吹干至釉质表面呈白垩色。D组天然牙不酸蚀作为对照组。A组:酸蚀釉质片直接浸泡于人工唾液中(5mL/样本)B组:酸蚀釉质片经LZM/ACP+NaClO处理后浸泡于人工唾液(5mL/样本)C组:酸蚀釉质片经LZM/ACP+NaClO+Gly处理后浸泡于人工唾液(5mL/样本)D组:天然牙齿未经任何处理浸于人工唾液中(5mL/样本)以上各组釉质分别矿化3天、7天,利用X射线衍射(Diffraction of X-Rays,XRD)分析其衍射图谱,确定晶体的原子和分子结构;扫描电镜(Scanning Electron Microscope,SEM)观察样品的表面形态;X射线能谱元素成像分析技术(EDX-Mapping)进行元素的定性和定量分析,并可分析样品微区的化学成分等信息,以检测酸蚀釉质再矿化效果。结果:1、溶菌酶可以和ACP形成LZM/ACP纳米微粒来稳定溶液中较高浓度钙磷离子。2、在釉质龋体外人工模型中,仿照人体中金属基质蛋白酶降解釉原蛋白的过程,LZM/ACP纳米微粒被NaClO分解,在甘氨酸的诱导下,ACP纳米颗粒快速有序地在酸蚀釉质表面沉积。3、经检测,酸蚀釉质表面再矿化层的形态结构与天然釉质相似。结论:溶菌酶可以稳定较高浓度的无定形磷酸钙,在NaClO的分解下,通过甘氨酸的引导可以实现酸蚀釉质表面再矿化,这一过程是基于非经典的结晶理论,通过纳米粒子的定向附着来实现的,为临床早期龋的微创治疗提供了一种很有前景的方法。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R781.1
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
1.对象和方法
    1.1 材料与设备
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 实验设备
    1.2 实验方法
        1.2.1 溶菌酶-无定形磷酸钙纳米复合物的制备
        1.2.2 透射电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)+选区电子衍射(SelectedArea Electron Diffraction,SAED)表征 LZM/ACP、LZM/ACP+Na Cl O 纳米复合物
        1.2.3 人工唾液制备
        1.2.4 脱矿牙釉质样品制备
        1.2.5 脱矿牙釉质再矿化实验
        1.2.6 表征
        1.2.7 统计分析
2 实验结果
    2.1 TEM结果
    2.2 XRD结果
    2.3 SEM结果
3 讨论
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述牙釉质再矿化方法的研究进展
    综述参考文献
致谢
个人简历

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