RNA干扰血管内皮生长因子的表达对舌癌耐药细胞移植瘤的影响

发布时间：2020-10-16 09:50

　　 目的:研究短发夹RNA(short-hairpin RNA, shRNA)干扰抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,对人舌癌耐药细胞Tca/DDP移植瘤的影响及其可能机制。 方法:将人舌癌Tca8113耐药细胞Tca/DDP接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,并随机分为空白对照组(非转染组)、空载体组(转染空质粒载体)、无关片段组(转染无关对照质粒)、干扰质粒组(转染靶向VEGF的shRNA表达载体),每组6只。空载体组、无关片段组、干扰质粒组在接种第7d,以脂质体法在瘤内及瘤周注射转染质粒。观测移植瘤生长曲线,转染10次后取瘤体称重,原位杂交法检测移植瘤的VEGF mRNA,免疫印迹法检测移植瘤VEGF蛋白,免疫组化法检测CD34及细胞增殖抗原Ki67的表达比较移植瘤微血管参数及增殖性,并检测多药耐药蛋白P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、B细胞淋巴瘤/白血病因子-2(B cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2)及胞外信号调节激酶2(extracellular signal-regulated kinase 2, ERK2)蛋白表达。 结果:干扰质粒组的瘤体生长明显受到抑制(P0.05),移植瘤重量、微血管参数及增殖性低于其它3组(P0.05),且VEGF的mRNA及蛋白、P-gp、bcl-2及ERK2蛋白表达显著减少(P0.05)。 结论:RNA干扰抑制VEGF的表达,可减少P-gp的表达,并可能通过下调bcl-2及ERK2表达水平,抑制人舌癌Tca8113耐药细胞移植瘤的生长增殖及血管生成,提示靶向抑制VEGF可能为治疗耐药舌癌提供新途径。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R739.8
【部分图文】：

少（F=7.833,P=0.001；F=6.487,P=0.003），差异具有统计学意义，其他各组之间无统计学差异（P>0.05）(表 1)。图1 裸鼠移植瘤生长曲线Fig.1 Growth curve of xenografts of nude mice showed xenografts of interference group grewsignificantly slowly.表1 皮下接种后第37d各组裸鼠移植瘤的体积与重量Tab.1 Sizes and weights of xenografts on the 37th day after subcutaneous injection体积(mm3) 重量(g)空白对照组 827.99±104.56* 0.7060±0.1026*空载体组 802.12±109.41* 0.6962±0.1206*无关片段组 765.25±101.50* 0.6727±0.1019*干扰质粒组 568.67±96.25 0.4781±0.0860注：与干扰组质粒比较，*P<0.01。

A 空白对照组 B 空载体组 C 无关片段组 D 干扰质粒组图 2 在体及离体裸鼠移植瘤Fig2 Xenografts of mice in vivo and in vitro2. 原位杂交法检测移植瘤中 VEGF mRNA 的表达：干扰质粒组移植瘤组织中 VEGF mRNA 的平均光密度（0.08±0.02），显著低于空白对照组（0.19±0.04）、空载体组（0.17±0.03）及无关片段组（0.16±0.04）(F=11.998，P=0.001)，后 3 组间比较无统计学差异（P>0.05）（图 3）。A B C D

A B C DA：空白对照组；B：空载体组；C：无关片段组；D：干扰质粒组图3 原位杂交法检测裸鼠移植瘤组织的VEGF mRNA（×400）Fig.2 In situ hybridization showed that the expression of VEGF mRNA in xenografts ofinterference group was less than that of non-transfected group, mock control group andcontrol group transfected with scrambled sequence plasmid (P<0.05).3. Western blotting 检测 VEGF 蛋白：相对灰度值结果显示干扰质粒组中 VEGF 蛋白的表达（0.81±0.15）低于空白对照组（1.68±0.62）、空载体组（1.63±0.61）、无关片段组（1
【参考文献】

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本文编号：2843095