野黄芩苷对人牙周膜细胞保护作用的实验研究

发布时间：2020-10-30 09:37

　　 目的: 人牙周膜细胞作为牙周组织的基础细胞,在牙周组织的再生和修复中发挥着重要作用。本课题旨在探讨黄芩茎叶提取物-野黄芩苷对牙周膜细胞的保护作用,为野黄芩苷应用于临床治疗牙周病提供理论和实验依据。 方法: 1无菌取青少年因正畸拔除的健康牙,体外原代培养牙周膜细胞,免疫细胞化学方法鉴定细胞来源。 2实验分组及干预:分为正常对照组、LPS干预组、不同浓度野黄芩苷+LPS干预组。正常对照组用2% FBS的DMEM培养液培养牙周膜细胞;LPS组用100μg/ml的LPS处理细胞;野黄芩苷+LPS组分别用0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml的野黄芩苷和100μg/ml的LPS处理细胞。 3采用四唑盐比色(MTT)方法,观察野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响。 4采用流式细胞技术观察野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞的细胞周期的影响。 5采用酶动力学方法观察野黄芩苷对LPS抑制人牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性的作用。 6采用酶联免疫方法(ELISA)检测人牙周膜细胞培养上清液中的TNF-α水平。 7采用蛋白印迹(Western-blot)技术检测人牙周膜细胞MMP-1、MMP-2的表达情况。 8数据处理采用SPSS11.5统计学软件进行,采用单因素方差分析和LSD-t检验, P 0.05表示差异有统计学意义。 结果: 1体外培养牙周膜细胞成功后,对第三代细胞进行免疫细胞化学染色鉴定,显示细胞波形丝蛋白阳性、角蛋白染色阴性,确定为牙周膜细胞。 2野黄芩苷对牙周膜细胞增殖活性的影响 LPS干预组牙周膜细胞24h、48h、72h与相应同期正常对照组相比,牙周膜细胞增殖活性均明显降低,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01),说明100μg/ml LPS能明显抑制牙周膜细胞的增殖活性。同时段加入0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml不同浓度的野黄芩苷干预后,与LPS组相比,0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml浓度的野黄芩苷作用牙周膜细胞24h;0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml浓度的野黄芩苷作用牙周膜细胞48h; 0.1μg/ml、1μg/ml浓度的野黄芩苷作用牙周膜细胞72h时,牙周膜细胞增殖活性增加,差异具有统计学意义(P 0.05,P 0.01),提示野黄芩苷具有拮抗LPS抑制牙周膜细胞增殖活性的作用。 3野黄芩苷对牙周膜细胞的细胞周期影响 牙周膜细胞经100μg/ml LPS处理24h,G0/G1期、S期、G2M期细胞所占百分比分别与正常对照组的对应时相相比有所不同,但差异无统计学意义(P 0.05)。同时段加入1μg/ml浓度野黄芩苷后,G0/G1期所占百分比降低,而G2M期所占百分比和增殖指数(Prl值)明显升高,与LPS组比较,差异具有统计学意义(P 0.05)。 4野黄芩苷对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响 100μg/ml LPS处理牙周膜细胞72h,与正常对照组相比,ALP活性显著受到抑制(P 0.01)。同时段加入0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml不同浓度野黄芩苷后,在较低浓度0.001μg/ml、0.01μg/ml时作用不明显,0.1μg/ml对LPS抑制ALP活性已有明显的拮抗作用(P 0.05),在1μg/ml时拮抗作用达到高峰(P 0.01)。 5野黄芩苷对牙周膜细胞分泌TNF-α的影响 正常对照组的牙周膜细胞分泌较低水平的TNF-α。经100μg/ml LPS处理24h,牙周膜细胞分泌TNF-α水平提高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。同时段加入0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml不同浓度野黄芩苷,各浓度的野黄芩苷对LPS刺激TNF-α分泌均有显著的抑制作用(P 0.01),其中在野黄芩苷浓度1μg/ml时抑制作用达到最大,并且与较低浓度0.001μg/ml、0.01μg/ml野黄芩苷组比较,差异有统计学意义(P 0.01)。 6野黄芩苷对牙周膜细胞MMP-1、MMP-2蛋白表达的影响 6.1 MMP-1蛋白表达的结果 Western-Blot检测显示:HPDLCs经100μg/ml的LPS处理24h后,MMP-1蛋白表达量比正常对照组有所增多,但差异无统计学意义(P0.05)。同时段加入0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml不同浓度野黄芩苷后,随着药物浓度的增加,MMP-1蛋白表达量有减少趋势,但与LPS组比较,差异无统计学意义(P 0.05)。 6.2 MMP-2蛋白表达的结果 Western-Blot检测显示:正常对照组HPDLCs表达较低水平的MMP-2蛋白,100μg/ml的LPS处理HPDLCs 24h,MMP-2蛋白表达量增多,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P 0.05)。同时段加入0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml不同浓度野黄芩苷,MMP-2蛋白表达有所减少,但仅在10μg/ml野黄芩苷组,与LPS组比较差异有统计学意义(P 0.05)。 结论: 1 100μg/ml LPS抑制牙周膜细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,诱导牙周膜细胞的TNF-α的分泌和MMP-2蛋白表达。 2加入不同浓度的野黄芩苷能拮抗LPS对牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的抑制作用,并且能抑制TNF-α的分泌和MMP-2蛋白表达。 3本研究结果提示,野黄芩苷对人牙周膜细胞有保护作用。
【学位单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R781.4
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
英文缩写
研究论文 野黄芩苷对人牙周膜细胞保护作用的实验研究
    前言
    材料与方法
    结果
    附图
    附表
    讨论
    结论
    参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简历

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 熊魏;彭红;徐知;;灯盏花素胶囊溶出度测定方法研究[J];江西中医药;2011年04期

2 杨关鑫;王芳;何萍;赵玉红;;依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究[J];口腔医学;2011年06期

3 李隽;胥春;郝轶;刘晓峰;;牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化[J];上海口腔医学;2011年04期

4 严亚锋;马文龙;;HPLC法测定心脑联通分散片中野黄芩苷的含量[J];陕西中医学院学报;2011年04期

5 徐婧秋;吴丽萍;;脂多糖和白细胞介素-1β对人牙周膜细胞中诱导型一氧化氮合酶表达的影响[J];华西口腔医学杂志;2011年04期

6 李昂;赵俊杰;郭宁;石建峰;饶国洲;魏虹;苟建重;;黄芩苷对人牙周膜细胞功能活性调节的实验研究[J];口腔生物医学;2011年02期

7 耿家玲;王祥红;田润涛;明全忠;;灯盏花素注射液HPLC特征图谱研究[J];药物分析杂志;2011年08期

8 张丽娜;郑金华;李会平;李海霞;黄大勇;高钟秀子;崔海东;;野黄芩苷对鼠舌癌移植瘤新生脉管及弹性和胶原纤维的影响[J];口腔医学研究;2011年09期

9 叶殷殷;罗宪堂;杨凤琼;陈桂江;;复方治障明眼液乙醇提取工艺研究[J];临床医学工程;2011年06期

10 许彦枝;李娜;刘健;吴景景;杨凤英;罗冬青;;中药双黄补对人牙周膜细胞在玉米醇溶蛋白支架材料上黏附生长及增殖的影响[J];中国中西医结合杂志;2011年07期

相关博士学位论文 前10条

1 原工杰;孕激素受体在人牙周膜细胞中的表达及孕酮对细胞增殖和成骨分化影响的研究[D];第四军医大学;2010年

2 张云飞;人牙周膜细胞在弹性牵张力作用下核心结合因子的表达[D];第四军医大学;2002年

3 刘建林;正畸牙齿称动中牙周血管内皮生长因子（VEGF）的表达在骨改建中的作用机制[D];第四军医大学;2004年

4 谢晓莉;LTA及LPS对人牙周膜细胞凋亡和炎性细胞因子的影响[D];中南大学;2010年

5 赵艳红;Osterix在正畸牙周组织改建中的表达及调控机制研究[D];山东大学;2008年

6 关素敏;中间普氏菌增殖机制及对慢性牙周炎致病作用的研究[D];第四军医大学;2008年

7 魏福兰;ATF4与正畸牙周组织改建相关的实验研究[D];山东大学;2007年

8 张贤华;牙周致病菌的特异检测、治疗及其内毒素刺激人牙周膜细胞差异表达基因的研究[D];第四军医大学;2001年

9 杜岩;EMPs作用下人牙龈上皮细胞及牙周膜细胞基因表达差异研究[D];第四军医大学;2006年

10 刘名燕;牵张应力对MC3T3-E1和人牙周膜细胞成骨分化的影响及相关信号通路调控作用研究[D];第四军医大学;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 杨宁;野黄芩苷对人牙周膜细胞保护作用的实验研究[D];承德医学院;2010年

2 杨宾;658nm低能量激光照射对人牙周膜细胞生物学活性的影响[D];福建医科大学;2011年

3 赵弼洲;淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响[D];兰州大学;2011年

4 高钟秀子;野黄芩苷促进体外内皮细胞的血管生成[D];哈尔滨医科大学;2010年

5 张帆;盐酸小檗碱对体外培养人牙周膜细胞分泌白细胞介素-6的影响[D];兰州大学;2010年

6 李春光;骨碎补总黄酮联合淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响[D];重庆医科大学;2011年

7 秦雁雁;碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞中新型金属蛋白酶1表达的影响[D];吉林大学;2012年

8 沈舒宁;尼古丁和/或α-银环蛇毒素对人牙周膜细胞基质金属蛋白酶表达影响的研究[D];第四军医大学;2011年

9 张燕青;转化生长因子-β_1和神经生长因子对人牙周膜细胞增殖和分化的生物学作用[D];山西医科大学;2010年

10 段立立;内毒素对人牙周膜细胞表达TLR2和TLR4的影响[D];河北医科大学;2011年

本文编号：2862294