抗-EMMPRIN单克隆抗体对人舌鳞癌抑制作用的相关研究

发布时间：2020-11-01 18:53

　　 目的：本研究通过抗-EMMPRIN单克隆抗体、基质金属蛋白酶抑制剂多西环素、化疗药物顺铂及联合应用,观察其对人舌鳞Tca8113细胞及裸鼠移植瘤的影响,评估其对舌鳞癌抑制作用,从改变肿瘤细胞微环境的角度初探阻断肿瘤侵袭的机制。 方法： 一、细胞实验： 1.细胞培养：细胞复苏、传代、冻存。 2.细胞药物干预,MTT法(四甲基偶氮唑蓝法)评价抑制作用：通过加入药物抗-EMMPRIN单克隆抗体、多西环素、抗-EMMPRIN单克隆抗体与多西环素联合用药、抗-EMMPRIN单克隆抗体与顺铂联合用药,观察其舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制作用。 二、动物实验： 1.构建裸鼠Tca8113细胞皮下移植瘤动物模型：于裸鼠右腋皮下注射1×106个Tca8113细胞悬浮液,观察成瘤情况,记录移植瘤生长数据。 2.建模成功后药物干预：裸鼠成瘤两周后随机分为6组,每组8只,分别为阴性对照组(生理盐水,0.1ml/d)、阳性对照组(顺铂20mg/m2/d、抗-EMMPRIN单克隆抗体10mg/kg/d)、顺铂组(顺铂20mg/m2d)、抗-EMMPRIN单克隆抗体组(抗-EMMPRIN单克隆抗体10mg/kg/d)、多西环素组(多西环素20mg/ml/3d)、联合用药组(抗-EMMPRIN单克隆抗体10mg/kg/d、多西环素20mg/ml/3d)。开始给药后每隔3天称重裸鼠,游标卡尺测量肿瘤结节的长短直径。4周后处死,连同包膜完整剥离肿瘤组织,称重。根据肿瘤体积计算抑瘤率。 3.免疫组织化学法(SP法)检测EMMPRIN、MMP-2、MMP-9蛋白表达：采用SP法检测各组中裸鼠肿瘤组织内及EMMPRIN、MMP-2, MMP-9蛋白表达。结果判定应用半定量法,以肿瘤细胞的染色阳性率来推算整个肿瘤表达情况,400倍光镜下每张切片随机观察4个视野,阳性信号定位于细胞膜和细胞浆,MMP-2阳性信号定位于细胞膜和细胞浆,MMP-9阳性信号定位于细胞质和细胞膜,成棕黄色颗粒。每张切片随机选取4个高倍视野,计数癌细胞中阳性细胞数,分别按以下比例分级：0级为无明显阳性反应细胞；1级为阳性细胞10%、弱染色：2级为阳性细胞10%～50%；3级为阳性细胞50%、强染色。0～1级判为阴性表达；2～3级判为阳性表达。 结果： 1.细胞增殖抑制实验结果：抗-EMMPRIN单克隆抗体及多西环素联合用药24h、48h、72h对Tca8113细胞的增殖抑制作用强于单独使用抗-EMMPRIN单克隆抗体和多西环素；单独使用抗-EMMPRIN单克隆抗体对细胞的增殖抑制作用强于单独使用多西环素,P0.05,结果具有统计学差异。 2.瘤体重量及抑瘤率结果：阴性对照组、阳性对照组、顺铂组、多西环素组、抗-EMMPRIN单克隆抗体组及联合用药组瘤体重量分别为1.12±0.31g、0.60±0.12g0.86±0.11g、0.94±0.22g、0.74±0.19g及0.55±0.17g。阴性对照组与实验组之间差异具有统计学意义(P0.01),阳性对照组与实验组差异具有统计学意义(P0.05),联合用药与单纯用药组差异具有统计学意义(P0.05)。各组肿瘤体积变化：阴性对照组瘤体变化大,阳性对照组及三个实验组变化较小。对照组与阳性对照组及实验组之间差异具有统计学意义(P0.01),联合用药组较抗-EMMPRIN单克隆抗体组和多西环素组变化最小(P0.05),结果具有统计学意义；阳性对照组与实验组差异无统计学意义(P0.05),抗-EMMPRIN单克隆抗体组和多西环素组差异无统计学意义(P0.05)。阳性对照组、抗-EMMPRIN单克隆抗体组、多西环素组及联合用药组抑瘤率分别为37.74%、37.58%、34.28%及40.35%。 3.EMMPRIN及MMP-2, MMP-9蛋白表达：阴性对照组EMMPRIN蛋白阳性表达率为100%,MMP-2蛋白阳性表达率为100%,MMP-9蛋白阳性表达率为100%。阳性对照组EMMPRIN蛋白阳性表达率为25%,MMP-2蛋白阳性表达率为12.5%,MMP-9蛋白阳性表达率为12.5%。顺铂组EMMPRIN蛋白阳性表达率为100%,MMP-2蛋白阳性表达率为100%,MMP-9蛋白阳性表达率为100%。抗-EMMPRIN单克隆抗体组EMMPRIN蛋白阳性表达率为25%,MMP-2蛋白阳性表达率为12.5%,MMP-9蛋白阳性表达率为12.5%。多西环素组EMMPRIN蛋白阳性表达率为50%,MMP-2蛋白阳性表达率为50%, MMP-9蛋白阳性表达率为50%。联合用药组EMMPRIN蛋白阳性表达率为12.5%,MMP-2蛋白阳性表达率为12.5%, MMP-9蛋白阳性表达率为12.5%。 结论： 1.抗-EMMPRIN单克隆抗体及多西环素具有抑制Tca8113细胞增殖及裸鼠舌鳞癌移植瘤的生长作用,二者联合应用抑制作用加强。 2.抗-EMMPRIN单克隆抗体及多西环素与裸鼠舌鳞癌移植瘤内EMMPRIN及MMP-2, MMP-9蛋白表达相关,应用抗-EMMPRIN单克隆抗体及多西环素可降低EMMPRIN及MMP-2, MMP-9蛋白表达水平。 3.CD147蛋白表达下调,则MMP-2, MMP-9蛋白表达亦下调。 4.EMMPRIN与顺铂联合应用可提高舌鳞癌对顺铂敏感性从而达到抑瘤目的,与文献报道一致。
【学位单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R739.86
【文章目录】：
目录
中文摘要
Abstract
中英文縮略表
前言
材料与方法
实验一：联合抗-EMMPRIN单克隆抗体、顺铂对人舌鳞癌抑制作用的研究
    1.细胞实验
    2.动物实验
    3.病理切片制作
    4.免疫组化检测肿瘤标本中CD147, MMP-2, MMP-9蛋白的表达
实验二：联合抗-EMMPRIN单克隆抗体、多西环素对人舌鳞癌抑制作用的研究
    1.细胞实验
    2.动物实验
    3.病理切片制作
    4.免疫组化检测肿瘤标本中CD147，MMP-2, MMP-9蛋白的表达
结果
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 刘斌;曹云新;关素敏;吴军正;王哲;;PTEN基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞增殖的影响[J];口腔医学研究;2010年01期

2 徐海涛;杜杰;董新舒;;Doxycycline抑制大肠癌LS174T细胞侵袭的体外实验研究[J];中国肿瘤临床;2007年11期

3 谢兆兰;朱尤庆;林小玲;汤小燕;;强力霉素对胃癌细胞SGC-7901基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2表达的影响[J];胃肠病学;2006年04期

4 张庆诗,刘斌,杨连甲,陈希哲,陈琰;强力霉素对腺样囊性癌细胞系SAcc83增殖及侵袭行为的影响[J];实用口腔医学杂志;2001年06期

本文编号：2865944