人牙龈成纤维细胞体外诱导成骨分化的实验研究
发布时间：2020-11-10 00:29
干细胞在牙周组织工程中的应用越来越广泛。但是,各种干细胞分别存在着取材不易、对机体损伤较大、体外培养困难等缺陷。牙龈成纤维细胞是一种成体干细胞,由于具有活跃的自身更新能力、取材方便、对机体损伤较小、体外培养成活率高等优势,具有一定的研究价值。本课题拟通过体外培养及诱导牙龈成纤维细胞,检测牙龈成纤维细胞的成骨分化能力。实验一人牙龈成纤维细胞体外诱导成骨分化的实验背景：牙周组织工程是修复因牙周炎导致的牙周组织缺损的研究热点。牙龈成纤维细胞作为可能的牙周组织工程的种子细胞,越来越多地受到人们的关注。目的：人牙龈成纤维细胞(Gingival Fibroblasts, GFs)体外培养,诱导其向成骨细胞方向分化,研究其成骨分化能力。方法：提取人GFs,传代培养后进行成骨诱导培养,并检测碱性磷酸酶及钙结节。结果：与对照组比较,实验组人GFs经诱导后,出现碱性磷酸酶表达增强,并产生较多的钙结节。结论：人GFs经过体外培养及成骨诱导后,在牙周组织再生修复中有一定的应用前景。实验二利用可控的微纳米图案表面诱导人牙龈成纤维细胞向成骨样细胞定向分化背景：生物材料表面图案化在组织工程及细胞生物学等研究中具有十分重大的意义,也是研究材料表面与细胞间相互作用常用的方法之一。目的：研究微图案的尺寸对人牙龈成纤维细胞行为的影响,证明图案化表面能有效控制细胞的形貌。方法：在玻片表面制作高选择性二维化学微图案,将人牙龈成纤维细胞接种至两种尺寸的微图案表面,观察细胞形态。结果：间距同样是250μ m的情况下,90μm×90μm的微图案,相比30μm×30μm的微图案,更利于人牙龈成纤维细胞的生长和分化。结论：人牙龈成纤维细胞在小尺寸图案中铺展不好,而在大尺寸图案中细胞铺展良好。
【学位单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R78
【部分图文】：
纯化的梭形细胞。??蓝色为被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的细胞核，可观察细胞的位置和数量。绿色为被抗??波形丝蛋白抗体染色呈阳性的细胞。（图１Ａ）??蓝色为被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的细胞核，可观察细胞的位置和数量。未见绿色巧??光的阳性细胞，可见细胞角蛋白染色阴性。（图巧）??经免疫细胞化学染色，波形丝蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性，其结果符合中胚??层来源的成纤维细胞的生物学特性，且未混杂上皮来源细胞。??１２??
Ｆｉｓｈｅｒ）。??１．?２表面高选择性二维化学微图案的制备及表征??在玻片表面制备细胞微图案的步骤如图５所示。首先在玻片表面制备抗蛋白吸附??的Ｐ０ＥＧＭＡ膜，后经紫外照射，利用光掩模板在Ｐ０ＥＧＭＡ膜上制备抗蛋白吸附－促蛋白吸??附的二维化学微图案。??Ｉ?Ｇｌａｓｓ?Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ??／ｉｉｇｈ－ｐ?巧巧?ｕｒ＾??■＇＇Ｖ．??＂?／１?咖！?＼?Ｖ?巧□?口?Ｊ??ＰＥＧＭＡ?＾?＾?＾?＾?＼?々畫；□巧??＾??＇一?＇＇＂ｎ?—Ｐ?＂鬥—－？ｒ?—??（３）?／￣＾?Ｗ??０?回＾??略化３?回回?《［）ｆｉｂ胃ｅｔｉ。??ＣＷ３?回［ｐ／??ＰＥＧＭＡ?，，??尽?Ｗ）化琴ＪＪ琴??ｒ?ｎ?＾—ｒ?ｎ??图５表面细胞微图案制备步骤示意图。??玻片表面修饰Ｐ０ＥＧＭＡ分子的步骤如图６所示。玻片的预处理采用强氧化剂氧化??法，步骤为，将玻片（直径１２?ｍｍ）浸入ｐｉｒａｎｈａ溶液（９８％恥化与３０％巿〇２按３：１体??积比混合的溶液）中，于８０?－Ｃ水浴浸泡１小时，后用大量超纯水冲洗，氮气吹干并??于１２０?－Ｃ烘日分钟。预处理后，在玻片表面形成哲基Ｗ进行后续反应。抗蛋白吸附的??Ｐ０ＥＧＭＡ膜采用原子转移自由基聚合反应法制备。首先，将预处理后的玻片置于１０％??ＡＰＴＥＳ的乙醇溶液中，室温下反应３０分钟，反应后用乙醇冲洗表面，氮气吹干并于??１８??
尽?Ｗ）化琴ＪＪ琴??ｒ?ｎ?＾—ｒ?ｎ??图５表面细胞微图案制备步骤示意图。??玻片表面修饰Ｐ０ＥＧＭＡ分子的步骤如图６所示。玻片的预处理采用强氧化剂氧化??法，步骤为，将玻片（直径１２?ｍｍ）浸入ｐｉｒａｎｈａ溶液（９８％恥化与３０％巿〇２按３：１体??积比混合的溶液）中，于８０?－Ｃ水浴浸泡１小时，后用大量超纯水冲洗，氮气吹干并??于１２０?－Ｃ烘日分钟。预处理后，在玻片表面形成哲基Ｗ进行后续反应。抗蛋白吸附的??Ｐ０ＥＧＭＡ膜采用原子转移自由基聚合反应法制备。首先，将预处理后的玻片置于１０％??ＡＰＴＥＳ的乙醇溶液中，室温下反应３０分钟，反应后用乙醇冲洗表面，氮气吹干并于??１８??
【参考文献】
本文编号：2877185
【学位单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R78
【部分图文】：
纯化的梭形细胞。??蓝色为被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的细胞核，可观察细胞的位置和数量。绿色为被抗??波形丝蛋白抗体染色呈阳性的细胞。（图１Ａ）??蓝色为被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的细胞核，可观察细胞的位置和数量。未见绿色巧??光的阳性细胞，可见细胞角蛋白染色阴性。（图巧）??经免疫细胞化学染色，波形丝蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性，其结果符合中胚??层来源的成纤维细胞的生物学特性，且未混杂上皮来源细胞。??１２??
Ｆｉｓｈｅｒ）。??１．?２表面高选择性二维化学微图案的制备及表征??在玻片表面制备细胞微图案的步骤如图５所示。首先在玻片表面制备抗蛋白吸附??的Ｐ０ＥＧＭＡ膜，后经紫外照射，利用光掩模板在Ｐ０ＥＧＭＡ膜上制备抗蛋白吸附－促蛋白吸??附的二维化学微图案。??Ｉ?Ｇｌａｓｓ?Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ??／ｉｉｇｈ－ｐ?巧巧?ｕｒ＾??■＇＇Ｖ．??＂?／１?咖！?＼?Ｖ?巧□?口?Ｊ??ＰＥＧＭＡ?＾?＾?＾?＾?＼?々畫；□巧??＾??＇一?＇＇＂ｎ?—Ｐ?＂鬥—－？ｒ?—??（３）?／￣＾?Ｗ??０?回＾??略化３?回回?《［）ｆｉｂ胃ｅｔｉ。??ＣＷ３?回［ｐ／??ＰＥＧＭＡ?，，??尽?Ｗ）化琴ＪＪ琴??ｒ?ｎ?＾—ｒ?ｎ??图５表面细胞微图案制备步骤示意图。??玻片表面修饰Ｐ０ＥＧＭＡ分子的步骤如图６所示。玻片的预处理采用强氧化剂氧化??法，步骤为，将玻片（直径１２?ｍｍ）浸入ｐｉｒａｎｈａ溶液（９８％恥化与３０％巿〇２按３：１体??积比混合的溶液）中，于８０?－Ｃ水浴浸泡１小时，后用大量超纯水冲洗，氮气吹干并??于１２０?－Ｃ烘日分钟。预处理后，在玻片表面形成哲基Ｗ进行后续反应。抗蛋白吸附的??Ｐ０ＥＧＭＡ膜采用原子转移自由基聚合反应法制备。首先，将预处理后的玻片置于１０％??ＡＰＴＥＳ的乙醇溶液中，室温下反应３０分钟，反应后用乙醇冲洗表面，氮气吹干并于??１８??
尽?Ｗ）化琴ＪＪ琴??ｒ?ｎ?＾—ｒ?ｎ??图５表面细胞微图案制备步骤示意图。??玻片表面修饰Ｐ０ＥＧＭＡ分子的步骤如图６所示。玻片的预处理采用强氧化剂氧化??法，步骤为，将玻片（直径１２?ｍｍ）浸入ｐｉｒａｎｈａ溶液（９８％恥化与３０％巿〇２按３：１体??积比混合的溶液）中，于８０?－Ｃ水浴浸泡１小时，后用大量超纯水冲洗，氮气吹干并??于１２０?－Ｃ烘日分钟。预处理后，在玻片表面形成哲基Ｗ进行后续反应。抗蛋白吸附的??Ｐ０ＥＧＭＡ膜采用原子转移自由基聚合反应法制备。首先，将预处理后的玻片置于１０％??ＡＰＴＥＳ的乙醇溶液中，室温下反应３０分钟，反应后用乙醇冲洗表面，氮气吹干并于??１８??
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 何悦;张志愿;蒋欣泉;张秀丽;郭伟;;犬骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究[J];口腔颌面外科杂志;2006年03期
本文编号：2877185
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/2877185.html
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