根尖牙乳头干细胞对CD4 + T细胞Foxp3位点DNA甲基化影响的体外研究

发布时间：2021-07-06 03:35

　　目的:根尖牙乳头干细胞（stem cells from apical papilla,SCAP）来源于发育中的根尖牙乳头组织,具有优越的自我更新、多向分化及免疫调节性能。本课题组前期在体外构建SCAP与CD4+T细胞transwell共培养体系,发现SCAP可上调CD4+T细胞叉状头转录因子3（forkhead box protein-3,Foxp3）的表达水平,促使其向调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）转化。Tregs是一类CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞亚群,可通过抑制过激的免疫反应改善宿主局部免疫微环境,促进损伤组织的修复与再生。Foxp3是Tregs发育和成熟的关键转录因子。近来研究发现Tregs内Foxp3位点低甲基化状态是维持Foxp3稳定表达及Tregs获得完整免疫抑制表型的必要条件。因此,本课题拟探究SCAP在促进CD4+T细胞向Tregs转化过程中,对CD4+T细胞Foxp3位点甲基化水平,及DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT1）和去甲基化酶10-11易位蛋白（ten-eleven tra... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SCAP原代培养与鉴定（A）原代培养SCAP7天后可见细胞克隆集落形成；（B）细胞生长汇合至90%时，呈涡旋状

中国医科大学硕士学位论文15排列；（C）流式细胞术示SCAP阳性表达CD105、CD90、CD44、CD29，而不表达CD45、CD34；（D）SCAP成骨诱导3周后，茜素红S染色见矿化结节形成；（E）SCAP成脂向诱导4周后，油红O染色示脂滴形成。误差线：x±s。3.2小鼠脾脏CD4+T细胞纯化与激活从小鼠脾脏提取T淋巴细胞，免疫磁珠分选后获得CD4+T细胞，流式细胞术示CD4+T细胞纯度达97.27±2.30（%）（图2A）；CD4+T细胞激活前体积较小，呈圆球状，加入CD3、CD28抗体激活后细胞体积明显变大（图2B）。图2CD4+T细胞纯化与激活（A）免疫磁珠分选后CD4+T细胞纯度达97.27±2.30（%）；（B）CD4+T细胞激活48h后体积明显变大。3.3SCAP对CD4+T细胞增殖无明显作用将CD4+T细胞与SCAP通过transwell共培养72h后，利用流式细胞术检测各组CD4+T细胞的增殖水平，对照组（CD4+T细胞）中CD4+T细胞增殖率为7.72±1.69（%），共培养组（SCAP+CD4+T细胞）为9.09±1.89（%）（图3），两组细胞间的增殖水平无统计学差异（t=1.32,P>0.05）。

SCAP对CD4+T细胞增殖水平的影响


本文编号：3267438