多巴胺能神经营养因子真核表达、纯化及多克隆抗体制备

发布时间：2017-10-28 14:00

  本文关键词：多巴胺能神经营养因子真核表达、纯化及多克隆抗体制备

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【摘要】：目的:获得具有活性的脑多巴胺能神经营养因子(CDNF)蛋白并制备CDNF多克隆抗体。方法:选用VR1012作为真核表达载体,在HEK293T细胞中表达带有his标签的CDNF蛋白,镍柱亲和层析进行纯化,SDS-PAGE检测纯化情况,Western blot鉴定蛋白的正确性,MTT检测CDNF蛋白对PC12细胞的保护活性。免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果:构建的p VR1012-CDNF-his在HEK 293T细胞中高效分泌表达,镍柱亲和层析获得纯度90%以上的CDNF蛋白,MTT结果显示纯化获得的蛋白具有对PC12细胞的保护作用。免疫动物后,成功制备出CDNF多克隆抗体。结论:通过HEK293T细胞中表达-镍柱亲和层析获得具有纯度较高且具有生物活性的CDNF蛋白,并成功制备多克隆抗体以方便后续对于CDNF应用及相关机制的研究。
【作者单位】： 吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室;
【关键词】： CDNF 多克隆抗体 镍柱亲和层析 帕金森病
【基金】：国家自然科学基金项目(31300756,81472816) 吉林省科技发展计划青年科研基金项目(20140520007JH)资助
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 1本文受国家自然科学基金项目(31300756,81472816)和吉林省科技发展计划青年科研基金项目(20140520007JH)资助。帕金森病(Parkinson's disease,PD)是目前世界上第二大神经退行性疾病,在50岁以上人群中患病率显著上升[1-3]。PD最重要的病理特征是黑质致密部多巴能神经元大量减

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本文编号：1108499