SEA对T细胞增殖、活化及表面超微结构的影响

发布时间：2018-03-17 16:34

  本文选题：SEA　切入点：原子力显微镜　出处：《暨南大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：了解超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响；以及在SEA作用下CD3分子、ZAP-70、TCR(?)链在T细胞上的形态学、分子生物学水平变化特点。探讨SEA活化T细胞在信号传导通路上的特点,为SEA的应用提供相关支持。 方法：1,利用T细胞体外培养法分别于正常人外周血淋巴细胞、Jurkat细胞加入不同浓度SEA培养不同时间；2,利用CCK-8法检测细胞增殖活性；3,采用原子力显微镜(AFM)观察经SEA处理后T细胞表面超微结构变化,利用CD3抗体修饰的探针考察CD3分子在T细胞表面分布；4,应用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察经SEA刺激后T细胞CD69分子表达以及ZAP-70细胞膜内的分布边集；5,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链、ZAP-70在不同浓度SEA作用下的T淋巴细胞中表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式：2-△△Ct分析TCRζ链、ZAP-70基因表达差异。 结果：1,SEA可使人外周血T细胞CD69表达,且适宜浓度10～0.01mg/LSEA作用下T细胞增殖活性最大；2,SEA作用于T细胞不同时间6-48小时,T细胞表面超微结构发生改变,随着时间推移细胞表面粗糙度(Ra)先升高后降低,细胞表面陆续出现斑块状、裂隙状、大颗粒状等结构；3,CD3分子在经SEA作用后T细胞上呈现聚集趋势。4,SEA适宜浓度10～0.01mg／L能够引起ZAP-70在T细胞内荧光强度迅速变化,同一浓度SEA在1小时内,ZAP-70荧光强度先升高后降低。5,不同浓度SEA诱导T细胞TCRζ链、ZAP-70基因表达下降,2-△△Ct值均小于1,且不同浓度的SEA所诱导基因下降的程度不同,0.1mg/LSEA诱导下降程度最大。 结论：1,0.1～10mg／L超抗原SEA48小时体外引起Jurkat T细胞、正常人外周血T细胞显著增殖；2,SEA作用Jurkat T细胞不同时间(48小时内),细胞表面超微结构发生特异性改变；3,SEA作用正常人外周T细胞12小时,T细胞表达活化CD69分子；4,TCR信号转导途径上的重要分子ZAP-70在SEA作用T细胞过程中有一定贡献；5,SEA引发的TCR信号转导途径上TCRζ链、ZAP-70作用与经典TCR信号转导途径不同；6,SEA活化T细胞可通过旁路途径活化T细胞。
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of superantigen Staphylococcus aureus enterotoxin Agna on proliferation activity and surface ultrastructure of human T lymphocytes, and to investigate the effect of CD3 molecule ZAP-70 on the proliferation and ultrastructure of human T lymphocytes. To study the characteristics of SEA activated T cells in signal transduction pathway and to provide relevant support for the application of SEA. Methods in vitro T cell culture method was used to culture normal human peripheral blood lymphocyte Jurkat cells with different concentrations of SEA for different time. CCK-8 assay was used to detect cell proliferation activity and atomic force microscope (AFM) was used to observe SEA. After treatment, the ultrastructure of T cell surface was changed. CD3 antibody modified probe was used to investigate the distribution of CD3 molecule on T cell surface. The expression of CD69 molecule in T cell stimulated by SEA and the distribution edge of ZAP-70 cell membrane were observed by laser confocal microscopy. SYBR Green 鈪，

本文编号：1625581