高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞模型的建立及其在药物肝毒性评价中的应用

发布时间：2018-06-04 05:58

  本文选题：药物性肝损伤(DILI) + 高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞模型　； 参考：《药物评价研究》2015年04期

【摘要】：目的建立一种灵敏、快速的高细胞色素P450(CYPs)酶活性的大鼠原代肝细胞模型,用于评价经CYPs酶代谢后产生肝毒性的药物。方法分别采用苯巴比妥和β-萘黄酮两种CYPs酶广谱诱导剂构建大鼠原代肝细胞模型;应用"cocktail"探针底物法考察两种诱导剂对CYPs酶的影响;以基于CYPs酶代谢导致肝毒性的药物他克林(TAC)、双氯芬酸钠(DIC)和对乙酰氨基酚(PAR)为模型药物,评价所构建的高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞模型与普通大鼠原代肝细胞间灵敏性的差异;应用所构建的高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞模型评价维拉帕米(VER)的肝毒性。结果与普通大鼠原代肝细胞相比,3种模型药物在高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞中,在较低剂量时可使细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞中活性氧(ROS)水平升高,线粒体膜电位(MMP)水平下降,或相同剂量下得到更严重的损伤结果,CYPs酶抑制剂1-aminobenzotriazole(ABT)和metyrapone(MET)能抑制这3种损伤的发生;100μmol/L维拉帕米在普通大鼠原代肝细胞中并未引起LDH、ROS和MMP的改变,但在高CYPs活性大鼠原代肝细胞模型中,会引起细胞损伤,ABT和MET能抑制这种损伤。结论经诱导建立的两种高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞模型能更灵敏的评价基于CYPs酶代谢致毒药物的肝毒性;两种诱导剂诱导得到的高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞模型对经不同CYPs酶亚型代谢的药物评价结果有各自优势。应用高CYPs酶活性大鼠原代肝细胞模型证实维拉帕米的致毒机制是经CYPs酶代谢产生肝毒性。
[Abstract]:Objective to establish a sensitive and rapid rat hepatocyte model with high cytochrome P450 CYPsase activity and to evaluate the hepatotoxicity induced by CYPs enzyme metabolism. Methods the rat primary hepatocyte model was established with phenobarbital and 尾 -naphthalene flavonoids as extended-spectrum inducers, and the effects of two inducers on CYPs enzyme were investigated by "cocktail" probe substrate method. The CYPs enzyme metabolization-induced hepatotoxic drugs, tacrine, diclofenac sodium and paracetamol, were used as model drugs to evaluate the sensitivity of the primary hepatocyte model with high CYPs enzyme activity between the primary rat and the normal rat. The hepatotoxicity of verapamil was evaluated by using the rat primary hepatocyte model with high CYPs activity. Results compared with normal rat primary hepatocytes, three model drugs could increase the level of lactate dehydrogenase (LDH) and reactive oxygen species (Ros) in the supernatant at lower doses in the primary rat hepatocytes with high CYPs enzyme activity. The level of mitochondrial membrane potential (MMP) was decreased, or the damage was more serious at the same dose. The results showed that CYPs inhibitor 1-aminobenzotriazoledol (ABT) and metyrapone (MET) could inhibit the occurrence of these three kinds of damage, and verapamil did not cause the changes of LDHRos and MMP in the primary cultured rat hepatocytes. However, in the primary hepatocyte model of rats with high CYPs activity, cell damage could be inhibited by MET and ABT. Conclusion the two rat hepatocyte models with high CYPs enzyme activity can be more sensitive to evaluate the hepatotoxicity based on the metabolizing drugs of CYPs enzyme. The rat primary hepatocyte models with high CYPs enzyme activity induced by two inducers had their own advantages in the evaluation of drug metabolism by different CYPs isoforms. The primary rat hepatocyte model with high CYPs activity confirmed that the toxic mechanism of verapamil was induced by the metabolism of CYPs enzyme.
【作者单位】： 天津中医药大学中药学院;省部共建国家重点实验室培育基地天津市现代中药重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(No.81373890) 教育部高等学校博士学科点专项科研基金(No.20121210110011) 教育部长江学者与创新团队发展计划(No.IRT-14R41)
【分类号】：R329.2

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本文编号：1976263