兔关节软骨细胞的分离、培养及鉴定

发布时间：2018-06-28 03:44

  本文选题：关节软骨细胞 + 细胞培养　； 参考：《大连医科大学》2010年硕士论文

【摘要】： 目的：优化兔关节软骨细胞分离方法,探索其体外单层培养过程条件及端粒、生物学功能学特性的变化。 方法：选用4周龄雄性、健康、新西兰大白兔的关节软骨,采用机械、双酶消化法进行分离得到关节软骨细胞。测定细胞存活率,并在含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中进行体外单层培养。待细胞融合率达到85%至90%时,用胰蛋白酶消化收集并以相同密度铺板传代。逐代观察细胞形态及应用MTT法绘制细胞生长曲线；同时采用甲苯胺蓝染色和RT-PCR方法动态研究各代关节软骨细胞的蛋白多糖,Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白与端粒酶因水平的表达变化。 结果：本方法兔关节软骨细胞收集过程简便、高效,平均每克软骨可得到2×106个细胞。在体外单层培养的过程中,随传代次数增加,软骨细胞传代时间变长,细胞形态逐渐向“纤维样”细胞转化。Ⅰ型胶原蛋白基因水平的表达呈递增趋势,Ⅱ型胶原蛋白与端粒基因水平的表达呈递增趋势,细胞外基质蛋白多糖逐渐减少。前三代细胞具有较高的生物学及功能学特性表达,四代后主要表现为Ⅰ型胶原的高表达,而软骨细胞所特有的Ⅱ型胶原及蛋白多糖基本消失。整个趋势呈现去分化。 结论：1关节软骨细胞机械、双酶获取方法简便易操作,可获取大量存活率高的软骨细胞。 2.体外单层培养的兔关节软骨细胞前三代表型稳定,生物学及功能学特性表达良好。
[Abstract]:Aim: to optimize the separation method of rabbit articular chondrocytes, and to explore the changes of telomere and biological function in monolayer culture of rabbit articular chondrocytes. Methods: articular cartilage of 4 week old male healthy New Zealand rabbits was isolated by mechanical and double enzyme digestion. Cell survival rate was measured and monolayer culture was carried out in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum in vitro. When the cell fusion rate reached 85% to 90%, trypsin was used to digest and collect the cells. Cell morphology was observed generation by generation and cell growth curve was plotted by MTT method. Meanwhile, the expression of proteoglycan, type 鈪，

本文编号：2076588