贝氏柯克斯体抗原诱导人树突状细胞活化的研究

发布时间：2018-06-30 00:08

  本文选题：贝氏柯克斯体 + 树突状细胞　； 参考：《中国人民解放军军事医学科学院》2010年博士论文

【摘要】： 贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)为Q热(Q fever)病原体,专性胞内寄生的革兰阴性嗜酸菌。该菌的高致病性和对环境、理化因素的强抵抗力使其成为重要的生物战剂/生物恐怖剂。疫苗接种为预防贝氏柯克斯体感染的有效手段。虽然灭活贝氏柯克斯体全菌Q热疫苗具有良好的免疫保护效果,但是较强的副作用限制了它的推广应用。为研发安全有效的分子Q热疫苗,有必要研究贝氏柯克斯体主要抗原引发的机体免疫应答机制。 树突状细胞(dendritic cells, DCs)作为吞噬细胞的一种,是体内专职的抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APCs),在启动和调节免疫反应中发挥关键的作用。DCs分化成熟过程中具有未成熟(immature dendritic cells,iDCs)与成熟(mature dendritic cells,mDCs)两个阶段,iDCs负责摄取加工处理抗原,当受到抗原刺激时,iDCs迅速分化为mDCs,mDCs呈递摄取的抗原给T细胞,刺激T细胞活化,因而DCs是一种理想的生物免疫佐剂和抗原载体。 本研究建立了从人外周血分离单核细胞诱导分化成DCs的培养体系,直接从浓缩白细胞中分离出单核细胞,加入IL-4与GM-CSF诱导后使其分化为人源DCs。以CD83表达量作为衡量DCs成熟度的指标,分析体外诱导培养DCs表面T细胞共刺激分子CD86、CD80、CD40、CD54、CD58、HLA-DR(MHC II)、HLA-ABC(MHC I)的表达。 用灭活贝氏柯克斯体I相强毒新桥株和II相弱毒Grita株分别刺激DCs,发现它们诱导人源DCs活化水平差异明显。II相弱毒株刺激DCs各表面分子的表达量是I相强毒株刺激的1～2倍;贝氏柯克斯体强、弱毒株的差别主要是LPS的不同,I相强毒株LPS刺激DCs表面分子表达水平与I相强毒株相似,而去LPS强毒株刺激DCs表面分子表达水平与弱毒株相似,表明贝氏柯克斯体强毒株LPS不能有效激活人源DCs,无法使DCs由未成熟状态转变为完全成熟状态;提示贝氏柯克斯体强毒株的LPS掩盖了菌体外膜蛋白,致使DCs表面受体无法与贝氏柯克斯体表面蛋白相互识别,产生激活信号。 贝氏柯克斯体com1、icmO、enhA、secB、lo1A、hspB基因分别编码外膜蛋白Com1、Ⅳ分泌系统蛋白IcmO、增强入侵蛋白EnhA、蛋白输出蛋白SecB、外膜脂质载体蛋白Lo1A以及热休克蛋白HspB,其中Com1蛋白与HspB蛋白在免疫印迹中与贝氏柯克斯体感染血清反应强。6种重组蛋白对人源DCs的激活能力有强有弱:Com1激活DCs能力最强,它所激活DCs的表面分子表达水平最高,甚至强于大肠杆菌LPS;SecB激活DCs能力仅次于Com1,其刺激作用与大肠杆菌LPS不相上下;而HspB激活DCs的能力最弱,除个别表面分子的表达量在其刺激下稍有增加外,大部分表面分子尤其是成熟标志分子CD83的表达量仅为基础表达水平。Com1、SecB、HspB刺激人源DCs的表达的细胞因子也大不相同。Com1激活DCs和SecB激活DCs均表达相对高水平的细胞因子IL-12,而HspB刺激诱导出的不成熟DCs表达相对较高水平细胞因子IL-10。表型成熟度与表达细胞因子的不同表明Com1、SecB、HspB刺激的DCs处于不同活化状态,提示贝氏柯克斯体不同蛋白抗原刺激的DCs可以表现不同的免疫调节能力。 为观察处于不同活化状态的DCs对T细胞免疫反应的调节,将Com1、SecB、HspB刺激DCs及其培养上清分别刺激同种同体T细胞。与DCs分子表型相应,HspB刺激DCs和培养上清对T细胞的活化也显示出明显惰性,T细胞表面早期活化标志物CD69的表达仅有限上调,对T细胞的增殖毫无作用,表明HspB不具有启动机体细胞免疫的功能。Com1激活DCs和SecB激活DCs及培养上清均显著提高T细胞表面CD69表达,尤其Com1激活DCs培养上清诱导T细胞CD69表达量达80%以上;CD4+ T细胞与CD8+ T细胞CD69的高表达,证明两种T细胞处于活化状态。Com1激活DCs和SecB激活DCs均诱导T细胞表达I型细胞因子IFN-γ和炎性细胞因子TNF-α,表明T细胞的免疫应答朝向Th1和Tc1分化。另外,T细胞增殖实验揭示了Com1激活DCs和SecB激活DCs均能诱导T细胞高水平增殖,提示Com1和SecB具有诱导机体产生细胞免疫应答能力,为贝氏柯克斯体保护性抗原,可以诱导机体产生细胞免疫应答。
[Abstract]:Coxiella burnetii ( Coxiella burnetii ) is a pathogen of Q fever ( Q fever ) . It has high pathogenicity and strong resistance to environment and physical and chemical factors .



Dendritic cells ( DCs ) , as one of phagocytes , play a key role in the initiation and regulation of immune responses . DCs are responsible for the initiation and modulation of immune responses . DCs are responsible for the uptake of processed antigens . DCs are rapidly differentiated into mDCs and mDCs are rapidly differentiated into mDCs when stimulated by antigen . DCs are activated by T cells , so DCs are an ideal biological adjuvant and antigen carrier .



The expression of CD80 , CD40 , CD54 , CD58 , HLA - DR ( MHC II ) and HLA - ABC ( MHC I ) were analyzed in vitro .



It was found that the expression level of DCs in DCs stimulated DCs was 1 - 2 times higher than that of strong virulent strains . The expression levels of DCs were similar to those of weak strains .



The expression levels of Com1 , SecB , HspB stimulated DCs were higher than that of Com1 , SecB and HspB .



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本文编号：2083965