嵌合中国河北株包膜蛋白基因的HCV细胞培养模型的传代分析

发布时间：2018-07-03 14:26

  本文选题：丙型肝炎病毒 + 嵌合　； 参考：《病毒学报》2015年06期

【摘要】：建立稳定的嵌合中国河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)细胞培养体系,进行传代特性分析。本研究经体外转录获得嵌合中国河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)全长RNA,脂质体法转染Huh7.5-CD81细胞,连续传代培养,进行Real Time RT-PCR、间接免疫荧光、Western blot、再感染试验与感染滴度检测及序列分析。结果表明:嵌合重组HCV RNA转染Huh7.5-CD81细胞后可产生感染性的病毒颗粒(HCVcc);传代过程中,Western blot可检测细胞内HCV蛋白的表达;IFA检测阳性细胞数逐渐增多,41d升至高峰,达80%~90%;Real Time RT-PCR检测传代细胞上清中HCV RNA拷贝数在104~107拷贝/mL;再感染实验嵌合HCVcc最高感染滴度为104ffu/mL。序列分析显示在传代后期嵌合的HCV包膜基因发生了适应性突变,导致6处氨基酸改变。结论嵌合中国河北株1b亚型包膜蛋白基因的HCV细胞培养体系可以产生具有感染性的嵌合HCV病毒颗粒,传代后感染性增强并且嵌合的HCV包膜基因发生了适应性突变。
[Abstract]:To establish a stable chimeric culture system of hepatitis C virus (HCV) cells containing the envelope protein gene of Hebei strain of China. In this study, hepatitis C virus (HCV) full-length RNAs were obtained by transcription in vitro and transfected into Huh7.5-CD81 cells by liposome method. Real time RT-PCR, indirect immunofluorescence Western blot, reinfection test, detection of infection titer and sequence analysis were performed. The results showed that chimeric recombinant HCV RNA transfected Huh7.5-CD81 cells could produce infectious viral particles (HCVCC), and that the number of positive cells could be detected by Western blot during the passage of Huh7.5-CD81 cells. The copy number of HCV RNA in the supernatant was 104107copies / mL. the highest infection titer of HCVCC was 104ffu / mL. Sequence analysis showed that adaptive mutations occurred in the chimeric HCV envelope gene at the later stage of passage, resulting in 6 amino acid changes. Conclusion the HCV cell culture system combined with subtype 1b envelope protein gene of Hebei strain of China can produce infectious chimeric HCV virus particles. After passage, the infection of the chimeric HCV envelope gene is enhanced and the chimeric HCV envelope gene is mutated adaptively.
【作者单位】： 内蒙古医科大学微生物教研室;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;
【基金】：国家自然科学基金(81373229) 传染病科技重大专项(2013ZX10004601,2013ZX10004609) 内蒙古医科大学科技百万项目(NY2011BW003)
【分类号】：R373.21

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本文编号：2093955