磷酸钙晶体诱导人巨噬细胞HMGB1表达的实验研究

发布时间：2017-03-28 15:04

  本文关键词：磷酸钙晶体诱导人巨噬细胞HMGB1表达的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨磷酸钙晶体刺激U937人巨噬细胞后高迁移率族蛋白B1（High mobility group protein B1，HMGB1）的释放和表达水平。 方法：光镜观察磷酸钙晶体刺激后U937人巨噬细胞的形态变化；用100ug/ml的磷酸钙晶体刺激人巨噬细胞，分别于刺激后0、6、12、18、24、30、36h和48h，用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞培养液上清、细胞浆和细胞核内HMGB1蛋白的含量；用实时荧光定量PC（RReal-time PCR，RT-PCR）检测细胞中HMGB1的mRNA的表达情况；分别于磷酸钙晶体刺激后0、1、2h和4h，用酶联免疫吸附实验（Enzymelinked immunoassay，ELISA）测定细胞培养液上清中TNF-α、IL-6和MCP-1的含量。 结果：磷酸钙晶体刺激后0-6h细胞培养液上清无法清晰检测到HMGB1蛋白，12h后细胞培养液上清HMGB1蛋白含量开始增加，18h达到高峰，以后稳定在较高水平，48h又出现明显高峰。磷酸钙晶体刺激前，HMGB1蛋白主要分布于细胞核内，细胞浆含量相对较少；在刺激12-48h细胞浆中HMGB1蛋白含量逐渐增加；而细胞核内HMGB1在刺激后18-24h含量减少，30-48h后细胞核内HMGB1蛋白含量又逐渐增多。RT-PCR结果显示，磷酸钙晶体刺激0-12h，培养细胞中HMGB1蛋白的mRNA表达量无明显变化，18-24h培养细胞中HMGB1的mRNA表达量明显增加。ELISA结果显示，磷酸钙晶体刺激1h，细胞培养液上清中TNF-α、IL-6及MCP-1表达和释放增加，4h达到明显高峰。磷酸钙晶体刺激0-12h细胞形态、分布无明显变化，18h后细胞开始聚集、成团。 结论：磷酸钙晶体可以诱导U937人巨噬细胞分泌、产生HMGB1蛋白。磷酸钙晶体可以诱导人巨噬细胞内HMGB1、TNF-α、IL-6及MCP-1的表达和释放增加，且HMGB1的释放时间明显晚于TNF-a、IL-6和MCP-1的释放时间；磷酸钙晶体诱导巨噬细胞内的HMGB1从细胞核向细胞浆转位，，并释放到细胞外；磷酸钙晶体可以诱导U937人巨噬细胞HMGB1蛋白mRNA基因表达上调；磷酸钙晶体可以刺激巨噬细胞聚集、成团。
【关键词】：高迁移率族B1 磷酸钙 巨噬细胞
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 目录3-4
• 中英文对照表4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-10
• 材料和方法10-25
• 结果25-31
• 讨论31-34
• 结论34-35
• 参考文献35-37
• 综述37-46
• 参考文献43-46
• 致谢46

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