小鼠脊髓源神经干细胞与人骨髓间充质干细胞定向诱导为运动神经元的实验研究

发布时间：2017-03-28 23:16

  本文关键词：小鼠脊髓源神经干细胞与人骨髓间充质干细胞定向诱导为运动神经元的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本部分实验旨在通过干扰miR-31诱导小鼠脊髓源神经干细胞向运动神经元分化，探讨干扰miR-31对神经干细胞向运动神经元分化的影响的同时，进一步检测miR-615, miR-126,miR-128三种基因的表达变化，探讨该三种基因在miR-31基因被干扰后可能发挥的作用及它们与miR-31可能存在的作用关系。 方法：将怀孕14-15天的昆明小鼠麻醉后取出胚胎小鼠，逐层剥离取出脊髓组织后制备成单细胞悬液，待原代细胞球大量形成并应用免疫细胞化学技术检测Nestin呈阳性表达后，分为四组：第一组添加入mmu-miR-31Anti-miRTMmiRNAInhibitor，第二组加入Anti-miR Negative Control#1，第三组由培养瓶中接种到六孔板里后，加入DMEM/F12培养基，第四组为完全空白组，即继续在培养瓶中培养。按照以上分组方法处理后置于37℃，5%CO2培养箱中孵育3天。3天后分别提取以上分组中细胞的总RNA,应用荧光定量PCR技术及免疫细胞化学技术分析四个分组中运动神经元标记物ChAT基因的表达变化，并同时运用PCR技术检测miR-615,miR-126,miR-128三种miRNA基因的表达变化。 结果：小鼠胎鼠脊髓源神经干细胞经干扰miR-31诱导后，免疫细胞化学检测及荧光定量PCR技术均可见运动神经元的标记基因ChAT表达显著增高，，同时miR-615,miR-126,miR-128三种miRNA也在miR-31被干扰后表达显著增高 结论：小鼠脊髓源神经干细胞具有向运动神经元分化的潜能，干扰miR-31可以定向诱导脊髓源神经干细胞向运动神经元分化，干扰miR-31可以对miR-615、miR-126、miR-128三种miRNA的表达产生了影响，并共同参与了对神经干细胞定向向运动神经元分化的调控。 目的：本部分实验通过离心分层所采集的人体骨髓血分离并获得了人骨髓间充质干细胞，并通过体外培养使其大量增殖与分化，为了解其分化特点及定向诱导其向运动神经元方向分化提供了充分的细胞来源。并在此基础上通过采用全反式维甲酸（RA）与音猬因子（Shh）联合诱导人骨髓间充质干细胞定向向神经干细胞乃至运动神经元方向分化，观察其在分化过程中Nestin与Hb9的表达变化情况。 方法：采用离心分离法获得人骨髓间充质干细胞，体外培养使其大量扩增后使用含有RA与Shh的诱导液处理，应用免疫细胞化学及荧光定量PCR方法分析Nestin与Hb9表达的变化情况。 结果：人骨髓间充质干细胞经过RA与Shh诱导后Nestin与Hb9的表达明显高于未加RA与Shh的对照组及空白组。 结论：hBMSC具有向神经干细胞乃至运动神经元方向分化的潜能。RA与Shh可以在体外诱导hBMSC定向向该方向分化。
【关键词】：脊髓源神经干细胞 miR-31 ChAT miR-615 miR-126 miR-128 骨髓间充质干细胞 运动神经元 Nestin Hb9 人
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R338
【目录】：

• 前言5-7
• 第一部分 干扰 miR-31 诱导神经干细胞向运动神经元分化的实验研究7-29
• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 研究现况9-10
• 材料与方法10-18
• 结果18-23
• 讨论23-26
• 结论26-27
• 参考文献27-29
• 第二部分 RA 与 Shh 诱导人骨髓间充质干细胞定向向运动神经元分化的实验研究29-47
• 摘要29-30
• Abstract30-31
• 研究现况31-32
• 材料与方法32-38
• 结果38-42
• 讨论42-44
• 结论44-45
• 参考文献45-47
• 综述47-53
• 参考文献50-53
• 攻读学位期间发表论文情况53-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 邓镇;姜晓丹;徐如祥;蔡颖谦;邹雨汐;杜谋选;;维甲酸和音猬因子促进骨髓基质细胞向运动神经元发育的实验研究[J];中华神经医学杂志;2006年06期

2 邓春圣;王春芳;朱光君;李鹏飞;李京力;;miR-126、miR-31在运动神经元与神经干细胞分化所得胆碱能神经元间表达情况的比较[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2012年02期

3 索耀君;王春芳;;MiR-615在平行培养的神经干细胞与运动神经元的表达比较[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2012年02期

4 ;miR-124 and miR-128 differential expression in bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells[J];Neural Regeneration Research;2010年11期

5 李鹏飞;王春芳;柳勇;崔素梅;邓春圣;龙志晶;刘彩玉;;BMSCs诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1表达对Stmn1和Sept9基因的影响[J];神经解剖学杂志;2013年01期

6 王世强;娄淑杰;;常氧和低氧条件下介导大鼠神经干细胞分化的信号通路分析[J];神经解剖学杂志;2013年02期

7 尹文化;金大地;鲁凯伍;闫慧博;余磊;王璐;;大鼠脊髓全横断损伤模型标准化的初步探索[J];中国临床解剖学杂志;2008年06期

8 杨巍;王晓明;;微电流脉冲体外诱导神经干细胞增殖分化的研究[J];中国实验诊断学;2010年05期

9 林中;袁园;李小玲;程晓雯;张诚;郑清华;;重症急性胰腺炎大鼠结肠黏膜下神经节一氧化氮合酶阳性神经元及乙酰胆碱转移酶阳性神经元的改变[J];安徽医科大学学报;2012年10期

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本文编号：273249