中国8省非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

发布时间：2017-03-28 23:08

  本文关键词：中国8省非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：初步了解中国非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacterium，NTM）的种类，为非结核分枝杆菌病的临床诊断、治疗和预防提供重要依据；评价聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP，PRA）和基因测序等方法在NTM鉴定中的作用。 方法： 1.2005年~2012年8年间收集来自中国8省（安徽、福建、甘肃、湖南、江西、内蒙古、四川和新疆）的省级结核病防治所/结核病院使用对硝基苯甲酸（PNB）/噻吩-2-羧酸肼（TCH）鉴别培养基的方法初步鉴定出的610株非结核分枝杆菌临床分离株，常规培养、保存。 2.同时使用PNB/TCH鉴别培养和多位点PCR方法进一步进行分枝杆菌菌种鉴定。 3.采用基于hsp65和rpoB基因的PRA方法将以确定的非结核分枝杆菌鉴定至种/亚种。对PRA方法不能鉴定出种/亚种者，采用多基因（包括rpoB、hsp65、ITS、gnd、glpK、secA和sodA）测序分析完成鉴定。 结果： 1.共收集到初步鉴定为NTM的临床分离菌株610株，，经本研究使用PNB/TCH鉴别培养和多位点PCR方法鉴定为53株为结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB），其他557株可能为非结核分枝杆菌。 2.使用PRA和测序方法对这557株进一步鉴定后，发现了4株为支气管戈登菌（Gordonia bronchialis），46株鼻疽诺卡菌（Nocardia farcinica）；和507株非结核分枝杆菌。其中非结核分枝杆菌共有28种，分别为：66株脓肿分枝杆菌（M. abscessus），106株鸟分枝杆菌（M. avium），17株龟分枝杆菌（M. chelonae），3株哥伦比亚分枝杆菌（M. colombiense），12株偶发分枝杆菌（M. fortuitum），1株日内瓦分枝杆菌（M. genavense），34株戈登分枝杆菌（M. gordonae），1株荷斯坦分枝杆菌（M. holsaticum），209株胞内分枝杆菌（M. intracellulare），3株堪萨斯分枝杆菌（M. kansasii），2株熊本分枝杆菌（M. kumamotonense），6株缓黄分枝杆菌（M. lentiflavum），1株马提尼分枝杆菌（M. mantenii），5株马赛分枝杆菌（M. marseillense），24株马西利亚分枝杆菌（M. massiliense），1株摩纳哥分枝杆菌（M. monacense），2株新金黄分枝杆菌（M. neoaurum），3株副瘰疬分枝杆菌（M. parascrofulaceum），1株福西亚分枝杆菌（M. phocaicum），2株萨斯喀彻温分枝杆菌（M. saskatchewanense），1株塞内加尔分枝杆菌（M. senegalense），2株首尔分枝杆菌（M. seoulense），2株脓毒分枝杆菌（M. septicum），1株赛特分枝杆菌（M. setense），2株下出分枝杆菌（M. shimoidei），1株M. stomatepiae，3株苏尔加分枝杆菌（M. szulgai）和2株三重分枝杆菌（M. triplex）。 3.507株非结核分枝杆菌中，按菌株数量统计，前9位分别为胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、戈登分枝杆菌、马西利亚分枝杆菌、龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌、缓黄分枝杆菌和马赛分枝杆菌。 结论： 1.共鉴定出28种非结核分枝杆菌，其中M. marseillense， M.saskatchewanense，M. seoulense，M. kumamotonense，M. stomatepiae，M. mantenii和Gordonia bronchialis6种为国内首次发现。证实在中国具有致病性的非结核分枝杆菌种类繁多。 2. PRA-rpoB（内切酶MspI和HaeIII）和PRA-hsp65（内切酶BstPI和HaeIII）方法具有良好的分枝杆菌菌种鉴定效果。 3.联合应多位点PCR、限制性片段长度多态性分析（PRA-hsp65和PRA-rpoB）和基因测序技术可有效的完成分枝杆菌菌种鉴定。
【关键词】：非结核分枝杆菌 菌种鉴定 PCR-RFLP 基因测序
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.91
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 本研究基金资助项目8-9
• 前言9-11
• 1 材料与方法11-21
• 1.1 材料11-15
• 1.2 方法15-21
• 2 结果21-31
• 2.1 PNB/TCH 初步鉴定和多位点 PCR 结果21-22
• 2.2 PRA 结果22-26
• 2.3 基因测序及聚类分析26-31
• 3 讨论31-36
• 参考文献36-39
• 附录39-80
• 综述80-103
• 摘要80
• Abstract80-81
• 1 非结核分枝杆菌（nontuberculous Mycobacteria，NTM）概述81-82
• 2 热休克蛋白 65 —聚合酶链反应—限制性酶切片段长度多态性82-84
• 3 RNA 聚合酶 β 亚基—聚合酶链反应—限制性酶切片段长度多态性84-86
• 4 讨论86
• 参考文献86-92
• 附表92-103
• 成果目录103-104
• 致谢104

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘常宏;沈悦斐;薛雅蓉;彭士明;;大肠杆菌严谨型RNA聚合酶的筛选及体内转录活性测定[J];微生物学报;2007年02期

2 黎一苇;于黎;张亚平;;系统发育研究中“长枝吸引”假象概述[J];遗传;2007年06期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 严兴;A～2/O固定生物膜法焦化废水处理系统群落空间演替模式的系统轨迹分析及应用[D];上海交通大学;2007年

  本文关键词：中国8省非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：273203