Notch信号通路在富集卵巢生殖干细胞的卵巢上皮组织和卵巢生殖干细胞的表达及动态变化
发布时间:2017-03-28 23:05
本文关键词:Notch信号通路在富集卵巢生殖干细胞的卵巢上皮组织和卵巢生殖干细胞的表达及动态变化,由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】:目的:通过探索Notch信号通路相关分子在新生、成年和衰老等不同年龄段小鼠卵巢组织及卵巢生殖干细胞中的表达及动态变化,阐明Notch信号通路在调控卵巢生殖干细胞增殖、分化和衰老中的作用,为解决卵巢功能早衰及相关疾病的防治问题提供理论依据。 方法:1.用免疫组织化学、Real-time PCR方法检测生殖细胞标志物MVH和Notch信号通路分子Notch1,Jagged1,Hes1,Hes5在3日龄,2月龄,20月龄小鼠卵巢上皮中的表达及动态变化。 2.用免疫荧光双标组织化学法检测生殖细胞标志物MVH和Notch信号分子Notch1,Jagged1,Hes1在3日龄,2月龄,20月龄小鼠卵巢上皮中的共表达及动态变化。 3.以STO细胞做饲养层,用两步酶消化法取3日龄小鼠卵巢分离获得单个卵巢生殖干细胞使用添加了LIF、EGF、bFGF等不同细胞生长因子的干细胞培养液在37℃、5%CO2条件下培养。 4.用免疫荧光细胞双标记法检测3日龄小鼠卵巢生殖细胞标志物MVH和Notch信号分子Notch1的共表达。 结果:1.免疫组织化学结果显示:MVH,Notch1,Jagged1和Hes1蛋白在卵巢上皮组织中有表达,其表达水平于3日龄最高,2月龄次之,20月龄表达水平最弱。 2.Real-time PCR结果显示:MVH,Oct-4,Notch1,Hes1和Hes5mRNA在卵巢组织中有表达,其表达水平于3日龄最高,2月龄次之,20月龄表达水平最弱甚至几乎没有。 3.免疫荧光双标组织化学法显示:小鼠卵巢生殖细胞标志物MVH和Notch信号分子Notch1,Jagged1和Hes1在卵巢上皮有共表达,MVH/Notch1,MVH/Jagged1,MVH/Hes1共表达强度在3日龄卵巢上皮呈强阳性荧光表达,2月龄卵巢上皮呈阳性表达且弱于3日龄,20月龄卵巢上皮几乎没有表达。 4.用两步酶消化法分离卵巢组织得到的细胞,经RT-PCR反应检测到生殖细胞标志物MVH,早期生殖细胞标志物Fragilis,,多能干细胞标志物Oct-4的阳性表达,而卵母细胞标志物Zp3未见明显表达。推测分离出的细胞为未分化的生殖干细胞。 5.免疫荧光细胞双标记法显示:生殖细胞标志物MVH和Notch通路受体Notch1共表达于卵巢生殖干细胞。 结论:富集卵巢生殖干细胞的卵巢上皮组织中存在Notch信号通路相关分子Notch1,Jagged1,Hes1,Hes5mRNA和蛋白表达,并且其表达水平均随着小鼠生殖年龄的增加而减弱;卵巢上皮组织中存在MVH/Notch1,MVH/Jagged1,MVH/Hes1的共表达,共表达水平亦随着小鼠生殖年龄的增加而减弱;卵巢生殖干细胞中亦存在MVH/Notch1的共表达。表明,Notch信号通路可能与卵巢生殖干细胞的增殖、分化和衰老有关。
【关键词】:卵巢生殖干细胞 Notch信号分子 表达及动态变化
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R339.22
【目录】:
- 摘要3-5
- ABSTRACT5-11
- 中英文缩略词表11-12
- 第1章 引言12-15
- 第2章 实验材料与方法15-24
- 2.1 材料15-17
- 2.1.1 实验动物15
- 2.1.2 主要试剂15-16
- 2.1.3 主要仪器16
- 2.1.4 主要的试剂配制16-17
- 2.2 方法17-24
- 2.2.1 免疫组织化学法体内定位小鼠卵巢生殖细胞标志物 MVH 和 Notch信号分子表达17-18
- 2.2.2 Real-time PCR 检测小鼠卵巢生殖细胞标志物和 Notch 信号分子表达18-20
- 2.2.3 免疫荧光双标记组织化学法20-21
- 2.2.4 小鼠卵巢生殖干细胞的饲养层制备21-22
- 2.2.5 小鼠卵巢生殖干细胞的体外分离22-23
- 2.2.6 细胞双标记免疫荧光法23
- 2.2.7 统计学分析23-24
- 第3章 结果24-38
- 3.1 免疫组化方法检测生殖细胞标志物和 Notch 信号分子在小鼠卵巢上皮组织中的表达及动态变化24-26
- 3.1.1 免疫组化方法检测生殖细胞标志物 MVH 在小鼠卵巢上皮组织中的表达及动态变化24-25
- 3.1.2 免疫组化方法检测 Notch 信号分子在小鼠卵巢上皮组织中的表达及动态变化25-26
- 3.2 Real-time PCR 检测生殖细胞标志物在小鼠卵巢组织中的表达及动态变化26-27
- 3.2.1 Real-time PCR 检测 MVH,Oct-4 在小鼠卵巢组织中的表达及动态变化26-27
- 3.3 Real-timePCR 检测 Notch 信号分子在小鼠卵巢组织中的表达及动态变化27-30
- 3.3.1 Real-time PCR 检测 Notch1 在小鼠卵巢组织中的表达及动态变化27-28
- 3.3.2 Real-time PCR 检测 Hes1 在小鼠卵巢组织中的表达及动态变化28-29
- 3.3.3 Real-time PCR 检测 Hes1 在小鼠卵巢组织中的表达及动态变化29-30
- 3.4 免疫荧光双标记检测卵巢生殖细胞标志物 MVH 和 Notch 信号分子在小鼠卵巢上皮组织共表达30-35
- 3.4.1 免疫荧光双标记检测卵巢生殖细胞标志物 MVH 和 Notch1 在小鼠卵巢上皮组织共表达30-32
- 3.4.2 免疫荧光双标记检测卵巢生殖细胞标志物 MVH 和 Jagged1 在小鼠卵巢上皮组织共表达32-33
- 3.4.3 免疫荧光双标记检测卵巢生殖细胞标志物 MVH 和 Hes1 在小鼠卵巢上皮组织共表达33-35
- 3.5 卵巢生殖干细胞的体外培养与鉴定35-37
- 3.5.1 卵巢生殖干细胞的体外培养35-36
- 3.5.2 卵巢生殖干细胞标志基因的检测36-37
- 3.6 细胞双标记免疫荧光检测卵巢生殖干细胞和 Notch 信号分子的共表达37-38
- 第4章 讨论38-42
- 4.1 小鼠卵巢组织上皮生殖细胞和 Notch 信号分子的表达及变化38-39
- 4.2 原代卵巢生殖干细胞的分离培养39-40
- 4.3 原代卵巢生殖干细胞的鉴定40
- 4.4 双标记免疫荧光检测卵巢生殖细胞标志物和 Notch 信号分子的共表达的生殖细胞40-42
- 第5章 结论与展望42-43
- 5.1 结论42
- 5.2 展望42-43
- 致谢43-44
- 参考文献44-47
- 攻读学位期间的研究成果47-48
- 综述48-55
- 参考文献54-55
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 白杨;叶哲伟;曾甫清;;大鼠睾丸中c-kit的表达特点与精原干细胞的分化[J];中华男科学杂志;2007年01期
2 金波;刘洋;岳占碰;李子义;张学明;;精原干细胞自我更新和分化的调控[J];生命科学;2011年03期
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本文编号:273190
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