调节角质形成细胞中的Notch信号对成纤维维细胞活性的影响

发布时间：2017-03-29 16:05

  本文关键词：调节角质形成细胞中的Notch信号对成纤维维细胞活性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 探讨在复合培养的条件下，通过调节角质形成细胞中的Notch信号，，了解其对成纤维细胞增殖能力、以及分泌细胞外基质和细胞因子的影响。 方法： 在诱导角质形成细胞终末分化的过程中，用Jagged-1或者γ-分泌酶抑制剂DAPT进行预处理，调控角质形成细胞中的Notch信号，然后通过血清刺刺激和提升至气液交界面使其达到复层生长和终末分化，后与成纤维细胞共培养。首先，在复合培养前，即诱导角质形成细胞分化的过程中,通过real-time PCR检测Notch信号受体Notc-1、相应配体Jagged-1、下游调控基因p21和p63的表达，明确Notch信号是否活化。其次，通过将调节Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞复合培养，细胞计数检测成纤维细胞增殖能力、real-time PCR和ELISA分别从mRNA和蛋白质水平检测成纤维细胞合成和分泌的Collagen-1、Fibronectin、KGF和细胞因子的表达。 结果： 用Fc段和DMSO分别对角质形成细胞进行预处理，检测其Notch信号下游分子p21和p63的表达，与Blank组相比，均未见明显异常（P0.05）。而用Jagged-1对角质形成细胞进行预处理，检测p21和p63、以及Notch信号受体Notch-1和相应配体Jagged-1在角质形成细胞中的表达，均发现Notch信号明显活化。用DAPT对角质形成细胞进行预处理，结果表明：相对于Blank组，DAPT组角质形成细胞中Notch信号受到抑制。分别对复合培养后第1天、第3天和第5天的成纤维细胞进行检测，发现Notch信号活化的Jagged-1组的角质形成细胞能够明显促进与其共培养的成纤维细胞的增殖、分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF、以及TGF-β1的合成（P0.05）。而在Notch信号被抑制的DAPT组，成纤维细胞的增殖能力与Blank组对比虽无明显差别（P0.05），但其分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF-β1的能力却明显受到抑制（P0.05）。 结论： Notch信号活化可能参与瘢痕的增生过程，阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养，能够明显抑制成纤维细胞合成和分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF-β1的能力，从而抑制瘢痕的增生。成纤维细胞合成的KGF和TGF-β1可能参与了该过程的调节。
【关键词】：Notch信号 角质形成细胞 成纤维细胞 复合培养 细胞外基质
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 文献回顾11-17
• 实验一 角质形成细胞诱导分化对 Notch 信号的影响17-29
• 1 材料17-18
• 1.1 主要试剂17
• 1.2 主要耗材17-18
• 1.3 主要仪器设备18
• 2 方法18-20
• 2.1 新生儿包皮角质形成细胞的培养18
• 2.2 角质形成细胞各种刺激物的配置18
• 2.3 角质形成细胞的复层培养18-19
• 2.4 qRT-PCR 检测19-20
• 2.5 统计学处理20
• 3 结果20-26
• 3.1 通过复合培养的方法，对角质形成细吧进行诱导分化，检测 Notch 信号的表达情况20-23
• 3.2 Fc 段、DMSO（DAPT 溶剂）对调节 Notch 信号的影响23-26
• 4 讨论26-29
• 实验二 调节角质形成细胞中的 Notch 信号对成纤维细胞活性的影响29-42
• 1 材料29-30
• 1.1 主要试剂29
• 1.2 主要耗材29-30
• 1.3 主要仪器设备30
• 2 方法30-33
• 2.1 新生儿包皮角质形成细胞的培养30
• 2.2 角质形成细胞各种刺激物的配置30-31
• 2.3 人正常皮肤成纤维细胞的原代培养31
• 2.4 角质形成细胞-成纤维细胞复合培养模型的建立31
• 2.5 成纤维细胞细胞计数31-32
• 2.6 ELISA 试剂盒检测细胞培养上清中的 Collagen-132
• 2.7 ELISA 试剂盒检测细胞培养上清中的 Fibronectin32
• 2.8 ELISA 试剂盒检测细胞培养上清中的 KGF32
• 2.9 qRT-PCR 检测32
• 2.10 统计学处理32-33
• 3 结果33-40
• 3.1 对成纤维细胞增殖能力的影响33-34
• 3.2 对成纤维细胞合成和分泌细胞外基质的影响34-37
• 3.3 对成纤维细胞合成和分泌 KGF 的影响37-38
• 3.4 对成纤维细胞合成促纤维化相关因子的影响38-40
• 4 讨论40-42
• 小结42-44
• 参考文献44-50
• 个人简历和研究成果50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 李冰;刁建升;楚菲菲;王大雷;郭树忠;夏炜;;阻断Notch信号抑制角质形成细胞的分泌功能的研究[J];中国美容医学;2012年04期

2 赵志力,付小兵,孙同柱,陈伟,孙晓庆;成人正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与表达特征的研究[J];中华烧伤杂志;2003年01期

3 贺肖洁,韩春茂,彭佳萍;瘢痕疙瘩和增生性瘢痕表皮异常的实验研究[J];中华外科杂志;2004年14期

4 沈丹蓓,夏隆庆;角质形成细胞与皮肤创面愈合瘢痕形成[J];中华整形外科杂志;2005年01期

  本文关键词：调节角质形成细胞中的Notch信号对成纤维维细胞活性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：274849