猪支原体肺炎灭活疫苗水性及水包油型佐剂研制及初步免疫效果评价

发布时间：2017-03-30 05:05

  本文关键词：猪支原体肺炎灭活疫苗水性及水包油型佐剂研制及初步免疫效果评价，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的：为了改进现有的国产猪支原体肺炎灭活疫苗,增强疫苗免疫刺激能力、降低疫苗毒副作用,本试验对猪支原体肺炎灭活疫苗水性或水包油型佐剂进行研究,旨在研发出更为优质和安全的水性或水包油型佐剂,与猪支原体肺炎灭活抗原(NJ株)配合使用,研制得到安全高效的猪支原体肺炎灭活疫苗(NJ株)升级产品。 试验方法：在此前研究的基础上,配制不同的佐剂配方,得到卡波姆974+左旋咪唑混合佐剂、卡波姆971+左旋咪唑混合佐剂、卡波姆974+左旋咪唑+黄芪多糖混合佐剂、壳聚糖十左旋咪唑混合佐剂、卡波姆974+免疫刺激复合物基质(ISCOM-matrix)昆合佐剂、DEAE-Dextran+左旋咪唑混合佐剂、β-葡聚糖+左旋咪唑混合物佐剂、DEAE-dextran+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂和β-葡聚糖十左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂,同时选用2种水性及水包油型商品化佐剂(GEL01ST、ISA11R VG)进行同步试验评价。将不同佐剂分别与猪肺炎支原体(NJ株)灭活抗原混合制成佐剂灭活疫苗免疫小鼠,检测小鼠淋巴细胞增殖情况及血清抗体水平,用以比较几种佐剂在猪支原体肺炎灭活疫苗上的免疫增强效果。 在本动物试验研究中,选用经小鼠试验初步评价筛选出免疫增强效果较好的4种水性或水包油型佐剂,即卡波姆974+左旋咪唑混合物佐剂、卡波姆974+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂、卡波姆974+免疫刺激复合物基质(ISCOM-matrix)混合物佐剂、壳聚糖+左旋咪唑混合物佐剂,同时选用2种水性及水包油型商品化佐剂(GEL01ST、 ISA11R VG)进行同步试验评价。使用不同佐剂分别与猪肺炎支原体(NJ株)灭活抗原配合免疫试验猪,同时,设埃索白油油苗和辉瑞瑞倍适旺灭活苗作对照,另外各设一组健康对照和攻毒对照,检测猪淋巴细胞增殖情况及血清抗体水平,此外,还对各试验组的攻毒保护效果进行评价。 在安全性评价研究中,将选用经小鼠试验所筛选的佐剂,与猪肺炎支原体(NJ株)灭活抗原制备灭活疫苗,皮下注射免疫小鼠,评价含佐剂疫苗的安全性。 试验结果：1.通过小鼠模型初步评价佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强效果,结果显示,卡波姆974+免疫刺激复合物基质混合物佐剂和壳聚糖+左旋咪唑混合物佐剂强烈地诱导产生高水平细胞免疫和体液免疫应答;卡波姆974+左旋咪唑混合物佐剂、卡波姆974+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂和ISA11R VG佐剂次之；β-葡聚糖+左旋咪唑混合物佐剂、DEAE-dextran+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂和β-葡聚糖+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂在细胞免疫应答方面作用显著,但体液免疫应答作用稍弱；而GEL01ST佐剂在体液免疫应答方面作用显著,细胞免疫应答作用稍弱。 2.在本动物试验研究中,相较于健康对照组/攻毒对照组,卡波姆974+左旋咪唑混合物佐剂在体液免疫应答和细胞免疫应答方面均有较强的免疫刺激能力;灭活疫苗组和油苗组次之。 攻毒后28d,剖检试验猪,对试验猪进行肺部病变评分,评价各试验组攻毒保护效果。结果表明,与攻毒对照组相比,佐剂1组(卡波姆974+左旋咪唑)、灭活疫苗组和油苗组(P0.01)显示出明显的攻毒保护效果,具有统计学差异。其攻毒保护效率分别为佐剂1组7/9,灭活疫苗组为6/9,油苗组4/9。 3.在佐剂疫苗安全性评价研究中,皮下注射免疫小鼠,均未产生不良影响。 试验结论：1.利用小鼠模型评价不同水性及水包油型佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗免疫增强作用的研究结果发现,卡波姆+免疫刺激复合物基质混合物(ISCOM-matrix)佐剂和壳聚糖+左旋咪唑混合物佐剂强烈地诱导机体产生高水平细胞免疫和体液免疫应答;卡波姆974+左旋咪唑混合物佐剂、卡波姆974+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂和ISA11R VG佐剂次之。 2.本动物的免疫及攻毒保护效果评价研究结果发现,佐剂1组(卡波姆974+左旋咪唑)强烈地诱导试验猪产生高水平细胞免疫和体液免疫应答,同时佐剂1组在攻毒保护效果评价中保护力最强,该佐剂有潜力成为猪支原体肺炎灭活疫苗佐剂。 3.佐剂安全性评价研究结果发现,将几种不同水性及水包油型灭活疫苗皮下注射免疫小鼠,均未对小鼠产生不良反应,可将几种不同水性及水包油型佐剂配合猪支原体肺炎灭活抗原免疫本动物。 本试验结果将为研发新型的用于猪支原体肺炎灭活疫苗的佐剂应用于临床提供基础。
【关键词】：佐剂 猪支原体肺炎 灭活疫苗 免疫效果评价 佐剂疫苗安全性
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要6-8
• 第一部分 文献综述8-16
• 1 猪支原体肺炎(MPS)的研究进展8-11
• 1.1 病原学8-9
• 1.2 临床症状9
• 1.3 病理变化9-10
• 1.4 致病机理10
• 1.5 经济损失10
• 1.6 防治措施10-11
• 2 猪支原体肺炎灭活疫苗的研究进展11-13
• 3 佐剂概述13-15
• 3.1 佐剂的作用机理13-14
• 3.2 灭活疫苗佐剂分类14-15
• 4 研究意义15-16
• 第二部分 研究内容16-47
• 试验一 利用小鼠模型评价不同水性及水包油佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强作用16-32
• 1 引言16-18
• 1.1 猪支原体肺炎疫苗免疫特点及对佐剂的需求16
• 1.2 猪支原体肺炎灭活疫苗佐剂的初步筛选16-18
• 2 材料与方法18-24
• 2.1 试验材料18-19
• 2.2 试验方法19-24
• 3 结果与分析24-30
• 3.1 免疫刺激复合物基质(ISCOM-matrix)佐剂的电镜观察24
• 3.2 小鼠淋巴细胞增殖反应测定24-26
• 3.3 小鼠血清IgG抗体的ELISA测定26-28
• 3.4 第一、二批次小鼠淋巴细胞增殖反应测定28
• 3.5 第一、二批次小鼠血清IgG抗体的ELISA测定28-30
• 4 讨论30-32
• 试验二 水性及水包油型佐剂猪支原体肺炎灭活疫苗对本动物的免疫及攻毒保护效果评价32-42
• 1 引言32
• 2 材料与方法32-36
• 2.1 试验材料32-33
• 2.2 试验方法33-36
• 3 结果36-39
• 3.1 猪支原体肺炎佐剂灭活疫苗(NJ株)肌肉注射免疫效力研究36-38
• 3.2 猪支原体肺炎灭活疫苗(NJ株)肌肉注射免疫攻毒保护研究38-39
• 4 讨论39-42
• 4.1 血清抗体水平与保护力39-40
• 4.2 细胞免疫与保护力40-41
• 4.3 小鼠模型试验与本动物试验检测结果的差异41
• 4.4 佐剂的作用41-42
• 试验三 佐剂的安全性评价42-47
• 1 引言42
• 2 材料与方法42-43
• 2.1 试验材料42
• 2.2 试验方法42-43
• 3 结果43-45
• 3.1 几种不同佐剂灭活苗皮下注射小鼠后的临床反应43
• 3.2 皮下注射几种不同佐剂灭活疫苗后对小鼠体重的影响43-44
• 3.3 皮下注射几种不同佐剂灭活疫苗后对小鼠平均日增重的影响44-45
• 4 讨论45-47
• 第三部分 结论47-48
• 参考文献48-52
• Abstract52-56
• 致谢56

【参考文献】

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  本文关键词：猪支原体肺炎灭活疫苗水性及水包油型佐剂研制及初步免疫效果评价，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：276270