缺血缺氧对兔骨髓间充质干细胞的凋亡蛋白表达的影响研究

发布时间：2017-03-30 12:23

  本文关键词：缺血缺氧对兔骨髓间充质干细胞的凋亡蛋白表达的影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：骨髓间充质干细胞（MSCs）是具有多向多种组织进行分化潜能的前体干细胞，可逃避宿主免疫系统监测、免疫调节、获取伤害小和易体外扩增培养等特点，使骨髓间充质干细胞在细胞组织工程医学方面有其广阔的应用前途。然而移植细胞的凋亡、失活等不良事件发生仍然是组织重建工程中亟需解决问题之一。而其中移植入器官的干细胞失活亡主要机制之一是由于缺血缺氧引起的细胞凋亡。 CASPASE是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶,负责选择性的切割某些蛋白质，从而造成细胞凋亡。局部缺氧、缺血作为细胞凋亡的一个重要的调节因素早已经得到了大家的认识，其可以诱发细胞Caspase-3、8、9等凋亡蛋白的活性变化从而引发一系列级联的程序来调节细胞凋亡。国内外对无血清及缺氧凋亡作用已经开展过一定的研究，本课题在其他体外实验的研究基础上，利用细胞和现代分子生物学等技术，，通过体外无血清及缺氧培养构建的缺血缺氧模型，检测在体外环境中对兔骨髓间充质干细胞的生物学影响；通过Western-blot等方法分别测定凋亡相关蛋白表达，初步探讨了缺氧模型下对兔骨髓间充质干细胞的影响机制；引入柚皮苷作为抗凋亡药物，进行对兔骨髓间充质干细胞预保护，检测凋亡蛋白表达的变化。 实验分为两部分进行： 第一部分兔骨髓间充质干细胞的培养、鉴定及生物学性状分析 目的：建立兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法，并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。 方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化兔骨髓间充质干细胞，进行形态学观察，绘制生长曲线，流式细胞仪检测细胞表面标记物，向成骨诱导分化等检测。 结果：兔骨髓间充质干细胞生长以梭形细胞为主，呈放射状排列的细胞集落，可连续稳定传代。生长曲线显示骨髓间充质干细胞符合正常细胞生长特征且生长活跃。第3代骨髓间充质干细胞CD29阳性细胞（98.42士1.01%）；CD44阳性细胞（97.6士1.81%），而CD45呈阴性表达。成骨诱导后,碱性磷酸酶染色、茜素红染色均呈阳性。全骨髓贴壁培养法操作方便，可大量分离、纯化、扩增，所获细胞具有间充质干细胞的生物学特性，经诱导培养后具有多向分化潜能。 结论：实验所用的骨髓间充质干细胞全骨髓贴壁培养法为组织工程提供充足的种子细胞来源具有重要的现实意义。 第二部分缺血缺氧模型下诱导骨髓间充质干细胞凋亡 目的：建立体外缺血缺氧模型及诱导骨髓间充质干细胞凋亡 方法：建立细胞缺氧模型（血清饥饿法+缺氧培养法）。通过MTT、流式细胞仪凋亡检测、Western-blot方法分别测定了细胞凋亡情况及其Casapse3凋亡相蛋白表达情况；适当浓度柚皮苷可减少细胞凋亡；柚皮苷对缺血缺氧下培养的骨髓间充质干细胞进行预保护后，运用Western-blot进行细胞凋亡蛋白表达。 结果：体外缺血缺氧模型可引起Casapse3凋亡相关蛋白表达上调。与时间具有关联性；进行柚皮苷预保护后，与缺血缺氧对照组相比，各时段（6、12、24、48h）凋亡蛋白表达均有所下降（P0.01）。结论：体外缺血缺氧模型可促使骨髓间充质干细胞凋亡率上升并与时间具有关联性；柚皮苷预保护可减少体外缺血缺氧下培养的骨髓间充质干细胞凋亡蛋白的表达。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 培养 形态学 分化 鉴定 无血清和缺氧 骨髓间充质干细胞 凋亡
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 目录3-4
• 英文缩略词4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 第一部分 骨髓间充质干细胞的分离，纯化和鉴定11-29
• 前言11-13
• 材料与方法13-18
• 结果18-23
• 讨论23-25
• 参考文献25-29
• 第二部分 缺血缺氧模型下诱导骨髓间充质干细胞凋亡检测29-46
• 前言29-30
• 材料与方法30-37
• 结果37-41
• 讨论41-43
• 参考文献43-46
• 综述46-72
• 参考文献57-72
• 致谢72-73
• 大学期间发表e笪恼
  
  本文编号：277126
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