TAK1抑制TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的分子机制研究

发布时间：2017-04-01 22:13

  本文关键词：TAK1抑制TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的分子机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的： 本课题旨在探讨TAK1介导TGF-β1诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡中的作用以及相关的分子机制。研究内容包括三个部分：一、观察TGF-β1在巨噬细胞RAW264.7凋亡中的作用和对TLR4受体表达的影响；二、观察TAK1在TGF-β1诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡中的作用；三、探讨TAK1介导TGF-β1诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡的相关分子机制。 研究方法与结果： 本课题实验分三部分进行： 第一部分应用流式细胞术检测TGF-β1刺激对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响,包括以下两个实验： 1、分别用5ng/ml、10ng/ml TGF-β1刺激巨噬细胞12小时,流式细胞仪检测巨噬细胞RAW264.7凋亡情况,结果显示TGF-β1具有诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡的作用,且这种作用具有剂量依赖性； 2、流式细胞术检测TGF-β1刺激对巨噬细胞RAW264.7TLR4表达的影响,这部分实验分组如下：对照组,LPS组、TGF-β1组、LPS与TGF-β1联合刺激组、anti-TGF-β1中和抗体组,以及LPS与anti-TGF-β1中和抗体联合刺激组,检测结果显示,单独LPS、TGF-β1均能诱导巨噬细胞TLR4表达下降,并且者联合刺激时效应增强,LPS与anti-TGF-β1联合刺激和LPS单独刺激时相比,TLR4表达无明显变化,说明LPS与外源性TGF-β1具有协同抑制TLR4表达的作用。 第二部分利用电转染的方法在巨噬细胞RAW264.7中过表达TAKl,流式细胞术检测TAK1对TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的影响,包括以下两个实验： 1、分别电转染10μg、15μg空质粒CMV、野生型质粒TAK1以及TAK1突变体TAK1K63W,60h后用lOng/ml TGF-β1刺激巨噬细胞30min,流式细胞术检测巨噬细胞RAW264.7凋亡情况,结果显示：与空质粒CMV、TAK1突变体TAK1K63W相比,TAK1具有明显抑制TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的作用,以10μg TAK1抑制凋亡效应最明显。 2、检测TAK1在TAB1作用下对TGF-β1诱导巨噬细胞细胞凋亡的影响,实验分组如下：Empty plasmid组、TAB1组、TAKl组、TAK1与TAB1共转染组、TAK1K63W组、TAK1K63W与TAB1共转染组,结果显示TAK1具有抑制TGF-β1诱导巨噬细胞细胞凋亡的作用,并且在与TAB1共转染时,TAKl抗凋亡效应进一步增强。 第三部分探讨TAK1抑制TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的分子机制,包括以下两个实验： 1.TAKl对TGF-β1介导的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-10等细胞因子的影响,实验分组如前,转染相应质粒入巨噬细胞,60h后,10ng/ml TGF-β1刺激巨噬细胞24小时,ELISA检测炎性细胞因子TNF-α、IL-10,结果显示：与对照组相比,TAK1、TAK1与TAB1共转染组在TGF-β1刺激后TNF-α分泌减少,各转染组IL-10分泌与对照组相比无明显差异。 2.检测TAK1对TGF-β1介导的巨噬细胞凋亡相关分子的影响：实验分组如前,转染相应质粒入巨噬细胞,60h后,10ng/ml TGF-β1刺激巨噬细胞,提取蛋白,Western blot检测巨噬细胞中caspase-3活化情况,结果显示,对照组在TGF-β1刺激时,caspase-3明显活化,过表达TAK1后caspase-3活化受抑制。 结论： 1、TGF-β1具有诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡的作用,且这种作用呈剂量依赖性；TGF-β1具有抑制巨噬细胞TLR4表达的作用。 2、在巨噬细胞RAW264.7中过表达TAK1能抑制TGF-β1诱导的巨噬细胞凋亡效应,TAB1具有促进TAK1抗凋亡效应的作用。 3、TAKl抑制TGF-β1介导的巨噬细胞的凋亡与TGF-β1刺激巨噬细胞分泌TNF-α相关,与IL-10无明显相关性；其凋亡信号传导与抑制caspase-3活化相关。
【关键词】：转化生长因子-β1 转化生长因子β1 激活激酶1 RAW264.7 凋亡
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、TGF-β1刺激对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响14-25
• 1.1 对象和方法14-18
• 1.1.1 实验材料14-15
• 1.1.2 方法与流程15-17
• 1.1.3 结果分析17-18
• 1.2 结果18-22
• 1.2.1 TGF-β1刺激对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响18-19
• 1.2.2 TGF-β1刺激对巨噬细胞TLR4表达的影响19-22
• 1.3 讨论22-24
• 1.4 小结24-25
• 二、TAK1对TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的影响25-37
• 2.1 对象和方法25-28
• 2.1.1 实验材料25-26
• 2.1.2 方法与流程26-28
• 2.1.6 结果分析28
• 2.2 结果28-34
• 2.2.1 TAK1抑制TGF-β1诱导的巨噬细胞凋亡29-31
• 2.2.2 TAK1对TGF-β1诱导巨噬细胞分泌炎性细胞因子的影响31-34
• 2.3 讨论34-36
• 2.4 小结36-37
• 三、TAK1抑制TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的分子机制37-47
• 3.1 对象和方法37-43
• 3.1.1 实验材料37-40
• 3.1.5 方法与流程40-43
• 3.1.6 结果分析43
• 3.2 结果43-45
• 3.2.1 TAK1对TGF-β1介导的巨噬细胞分泌炎性细胞因子的影响43-44
• 3.2.2 TAK1对TGF-β1介导的巨噬细胞凋亡相关分子的影响44-45
• 3.3 讨论45-46
• 3.4 小结46-47
• 结论47-48
• 参考文献48-53
• 发表论文和参加科研情况说明53-54
• 综述 TAK1与细胞凋亡54-67
• 综述参考文献61-67
• 致谢67

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