IL-17A对GM-CSF诱导的骨髓树突状细胞的影响

发布时间：2017-04-02 11:15

  本文关键词：IL-17A对GM-CSF诱导的骨髓树突状细胞的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 用GM-CSF、LPS体外诱导小鼠骨髓单个核细胞向树突状细胞(DC)分化及成熟,建立小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)体外扩增模型。在BMDC诱导分化及成熟的不同阶段加入不同浓度的rmIL-17,探讨IL-17A对BMDC分化及成熟的影响。 方法： 为建立小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)体外扩增模型,取6-8周的Balb/c小鼠的胫骨和股骨,用RPMI-1640培养基反复冲洗骨髓腔,裂解红细胞获得骨髓单个核细胞。制备2×106细胞/ml加入含200U/mlGM-CSF10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养液培养8天,每隔3天补充新鲜培养液。收获悬浮生长细胞,用磁珠分选技术纯化CDllc+细胞。纯化细胞加入LPS刺激继续培养36h使其充分成熟。采用流式细胞术检测BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC Ⅱ的表达,采用ELISA方法检测BMDC培养上清液中细胞因子IL-12p40、IL-10、IL-6及TNF-α的分泌。为了进一步探讨IL-17A在BMDC分化及成熟过程中的作用,在用GM-CSF诱导BMDC分化时,分别加入低浓度及高浓度的rmIL-17A(10ng/ml、100ng/ml),8天后收获悬浮生长细胞,分离纯化的CD11c+细胞加入LPS及／或不同浓度的rmIL-17A(50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml)继续培养24h。利用流式细胞技术和ELISA方法分别检测细胞表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC II的表达量以及细胞因子IL-12p40和IL-10的分泌。 结果： 小鼠骨髓来源的单个核细胞经GM-CSF诱导6-8天后细胞大量增殖并呈典型的DC细胞形态。LPS能够有效的刺激GM-CSF诱导分化BMDC的成熟,表现为BMDC表面共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达明显高于不加LPS刺激组；细胞培养上清液中细胞因子IL-12p40、IL-10、IL-6和TNF-a的分泌量较不加LPS刺激组显著增加。为了探索IL-17A对BMDC前体表型和分化的影响,分离获得BMDC前体细胞,加入低浓度rmIL-17A(10ng/ml)或高浓度rmIL-17A(100ng/ml)联合GM-CSF培养8天。结果显示：IL-17A能够促进GM-CSF诱导的BMDC表面共刺激分子CD40、CD86和MHCII的表达,且具有一定的剂量依赖性。为了证实IL-17A能否对已分化BMDC的成熟产生影响,我们向GM-CSF诱导8天的BMDC中加入不同浓度的rmIL-17A(50,100或者500ng/m1)继续培养培养36小时。结果显示,与不加rmIL-17A的对照组比较,加入不同浓度的IL-17A及各浓度rmIL-17A组之间BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC Ⅱ的表达量均没有明显变化,且各组培养上清中IL-12p40和IL-10的含量没有明显变,提示IL-17A不具有刺激已分化的BMDC成熟的功能。但在GM-CSF诱导BMDC分化过程中加入不同浓度的rmIL-17A,能够上调LPS刺激的BMDC共刺激分子CD80、CD86和MHC Ⅱ的的表达及细胞因子IL-12p40和IL-10的分泌,提示BMDC诱导分化过程中加入IL-17A促进LPS刺激的BMDC的成熟。 结论 一定剂量的GM-CSF能够诱导骨髓来源的单个核细胞分化为DC,LPS能够刺激GM-CSF诱导分化BMDC的成熟。成功建立了小鼠BMDC体外扩增模型,为研究IL-17A对BMDC的影响提供了实验基础。 IL-17A能够促进GM-CSF诱导的BMDC前体表面共刺激分子的表达,对BMDC前体表型的发展有促进作用,并且具有一定的剂量依赖性；IL-17A不能促进充分分化的BMDC表面分子的表达及细胞因子的分泌,即IL-17A对充分分化的BMDC的成熟无影响；BMDC诱导分化过程中加入IL-17A能够促进LPS刺激的BMDC的成熟。
【关键词】：骨髓来源树突状细胞(BMDC) IL-17A GM-CSF DC共刺激分子 IL-12p40 IL-10
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符号说明10-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果13-14
• 研究目的、方法14-15
• 对象和方法15-22
• 1 实验材料15-18
• 1.1 主要试剂15-16
• 1.2 主要仪器和设备16
• 1.3 主要试剂的配制16-18
• 1.4 实验动物18
• 2 实验方法18-22
• 2.1 小鼠BMDC的分离和培养18-19
• 2.2 CD11c免疫磁珠分离提纯成熟BMDC19
• 2.3 流式细胞术检测成熟BMDC表面分子19-20
• 2.4 ELISA检测细胞因子分泌20-21
• 2.5 统计分析21-22
• 结果22-36
• 1 小鼠骨髓来源的DC体外扩增方法的建立22-29
• 1.1 BMDC的形态22-25
• 1.2 BMDC的表型分析25-28
• 1.3 BMDC细胞因子分泌28-29
• 2 IL-17A对小鼠BMDC的调节作用29-36
• 2.1 IL-17A促进BMDC前体表型的分化29-31
• 2.2 IL-17A对充分分化BMDC的成熟无影响31-33
• 2.3 BMDC诱导分化过程中加入IL-17A促进LPS刺激的BMDC的成熟33-36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-45
• 发表论文和参加科研情况说明45-46
• 综述46-56
• 综述参考文献53-56
• 致谢56

【共引文献】

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 刘铁钢;基于肺与胃肠相关理论探讨银莱汤对食积肺炎动物模型肠黏膜屏障作用机制[D];北京中医药大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 卢娉霞;树突状细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中的作用研究[D];福建医科大学;2013年

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本文编号：282400