弓形虫新基因TgIMP1的生物信息学分析、克隆及表达

发布时间：2017-04-04 13:14

  本文关键词：弓形虫新基因TgIMP1的生物信息学分析、克隆及表达，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,可感染种类繁多的哺乳动物和人类。一般情况下,成年人感染弓形虫不会有太明显症状；而对于先天免疫系统有缺陷、或者进行器官移植手术的患者,感染弓形虫便可能会引起多种并发疾病,而且有可能致人死亡。弓形虫感染孕妇后,孕妇可将病原体可传染给胎儿,导致胎儿智力发育不全,甚至导致胎儿畸形、胎儿死亡等。家畜被弓形虫感染后,也会引发多种病症甚至死亡,造成经济上的严重损失。 核酸疫苗作为一种新兴的疫苗,具有操作简便、免疫目的性较强、相对较为安全而被高度重视。近年来,针对弓形虫病的DNA疫苗的研究取得大量的进展,然而,几乎没有一种疫苗可以彻底地预防和控制寄生虫病。 本研究分析鉴定了一种新型的弓形虫蛋白,名为'immune mapped protein1'(TgIMP1)。该类蛋白首先由Blake, D. P.等在爱美耳球虫属发现,并对抗爱美耳球虫感染有一定的保护性,其同源体蛋白也存在于刚地弓形虫和新孢子虫体内。Blake, D.P等认为这些寄生虫的保护性抗原具有一些共有的特性,因此,我们有理由推断,弓形虫体内的IMP1蛋白(TgIMP1)也具有抗弓形虫感染的能力。 我们运用多种生物信息学方法预测了该蛋白的物化特性、信号肽位点、跨膜结构域、抗原性、高级结构及其生物学功能。结果发现TgIMP1基因ORF全长1,697bp,编码一个含400个氨基酸的蛋白质,该蛋白含有多个翻译后修饰位点、亲水性区域、跨膜序列及淋巴B细胞抗原表位,这从理论上确定了TgIMP1具有潜在的免疫原性,是一种潜在的抗弓形虫病候选基因。然后,我们通过PCR方法扩增出目的基因,将其与克隆载体相连,形成重组质粒,并用PCR、双酶切、测序等方法对重组质粒进行鉴定。而后,我们将TgIMP1基因插入真核表达载体pBudCE4.1,形成重组真核表达质粒pBudCE4.1-TgIMP1,经双酶切、PCR等方法鉴定后,pBudCE4.1-TgIMP1被转入人体成纤维细胞HFF中进行表达。我们通过RT-PCR等技术对其表达情况进行鉴定。实验结果说明我们成功构建了pBudCE4.1-TgIMP1真核表达载体,并在HFF细胞中实现成功表达。 我们的研究不仅从理论上证明了TgIMP1具有抗原性和免疫保护性,也不仅从技术上证明了其作为抗弓形虫病核酸疫苗的可行性,同时还引入了一种新的方法——生物信息学分析法于弓形虫的研究中,为以后弓形虫免疫方面的研究做好铺垫。
【关键词】：弓形虫 TgIMP1 生物信息学 克隆 表达
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R382.5;Q78
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符号说明10-12
• 前言12-17
• 第一部分 弓形虫TgIMP1基因的生物信息学分析17-29
• 材料与方法17-19
• 结果19-28
• 讨论28-29
• 第二部分 弓形虫TgIMP1基因真核表达载体的构建与表达29-55
• 材料与方法29-46
• 结果46-53
• 讨论53-55
• 参考文献55-60
• 附图60-62
• 致谢62-63
• 攻读学位期间发表的学术论文63-64
• 学位论文评阅及答辩情况表64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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  本文关键词：弓形虫新基因TgIMP1的生物信息学分析、克隆及表达，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：285589