温度和时间对临床应用间充质干细胞长距离运输的影响

发布时间：2020-11-10 05:40

　　 间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)具有多向分化潜能和免疫调节能力,而且没有免疫原性,在临床上应用广泛,可以用于同种异体治疗多种自身免疫性疾病和组织修复等。但是干细胞的长距离运输和保存问题给间充质干细胞的广泛应用带来了一定的困难。目前,运输过程中时间和温度对干细胞存活率的影响不是十分明确。本实验以6组第4代骨髓间充质干细胞为例,采集细胞清洗后重悬于密封的生理盐水瓶中,可以直接用于临床注射。对注射前的细胞进行细胞表面标记和分化潜能鉴定,同时检测0℃、4℃、冰盒环境(8℃-17℃)、常温和37℃等不同的环境温度下干细胞随着时间的延长存活率的变化。实验结果显示,在设置温度为4℃的小型车载冰箱中运输的干细胞状态保存最好,在6小时内细胞存活率可以保持在90%以上,在保温箱中放置冰袋(8℃-17℃)保存的效果次之,在2小时内细胞存活率可以保持在90%以上。因此,推荐在超过2小时并保持在6小时内的长距离运输过程中,用4℃恒温小型冰箱保持干细胞的活性。如果运输时间超过6小时,不建议进行远距离运输,应该选择更快捷的交通工具,让运输过程保持在6小时内。
【部分图文】：

No.5rollupNo.28Issue,October2019292019年10月第5卷第28期智慧健康SmartHealthcare图1人骨髓MSCP0代细胞图2人骨髓MSCP4代细胞2.2人骨髓间充质干细胞的鉴定将6个MSC的第4代细胞进行细胞表面标记抗原流式鉴定，所有细胞CD73,CD90和CD105阳性表达达到95%以上，CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆几乎不表达，表达率在0-1%，图3所示为其中一个MSC细胞表面标记抗原的表达情况。6个细胞皆可以进行成骨、成脂和成软骨分化，图4中a，b和c分别显示成骨、成脂和成软骨分化阳性的图示。图3人骨髓MSC细胞表面标记抗原表达情况图4人骨髓MSC成骨、成脂和成软骨分化鉴定2.3时间温度对生理盐水中骨髓间充质干细胞的影响将6个4代的人MSC分别分成5份装入100mL密封生理盐水袋中，分别放入盛冰水混合物的保温盒（0℃）、4℃恒温车载小型冰箱、装有预先冷冻冰袋的保温盒（8-17℃）、常温保温盒（25℃左右）和37℃恒温培养箱（对照）。将上述30份细胞分别在6个时间点（0h,2h,4h,6h,8h和24h）用无菌1mL注射器抽取少量细胞进行存活率检测。发现只有4℃恒温保存的细胞保持存活率在90%上的时间最长，可以达到6小时，其次是放入装有预先冷冻冰袋的保温盒（8-17℃）的细胞，可以达到2小时（表1）。绘制成折线图后发现4℃恒温保存的方法细胞存活率在每个时间点都最高（图5）。图5时间和温度对人骨髓MSC存活率的影响注：a.台盼蓝染色法检测人骨髓MSC的细胞活性，活细胞染色显示细胞膜周围为蓝色，细胞内部为白色;死细胞细胞膜破损，染料进入?

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智慧健康SmartHealthcare图1人骨髓MSCP0代细胞图2人骨髓MSCP4代细胞2.2人骨髓间充质干细胞的鉴定将6个MSC的第4代细胞进行细胞表面标记抗原流式鉴定，所有细胞CD73,CD90和CD105阳性表达达到95%以上，CD14,CD34,CD45,HLA-DR皆几乎不表达，表达率在0-1%，图3所示为其中一个MSC细胞表面标记抗原的表达情况。6个细胞皆可以进行成骨、成脂和成软骨分化，图4中a，b和c分别显示成骨、成脂和成软骨分化阳性的图示。图3人骨髓MSC细胞表面标记抗原表达情况图4人骨髓MSC成骨、成脂和成软骨分化鉴定2.3时间温度对生理盐水中骨髓间充质干细胞的影响将6个4代的人MSC分别分成5份装入100mL密封生理盐水袋中，分别放入盛冰水混合物的保温盒（0℃）、4℃恒温车载小型冰箱、装有预先冷冻冰袋的保温盒（8-17℃）、常温保温盒（25℃左右）和37℃恒温培养箱（对照）。将上述30份细胞分别在6个时间点（0h,2h,4h,6h,8h和24h）用无菌1mL注射器抽取少量细胞进行存活率检测。发现只有4℃恒温保存的细胞保持存活率在90%上的时间最长，可以达到6小时，其次是放入装有预先冷冻冰袋的保温盒（8-17℃）的细胞，可以达到2小时（表1）。绘制成折线图后发现4℃恒温保存的方法细胞存活率在每个时间点都最高（图5）。图5时间和温度对人骨髓MSC存活率的影响注：a.台盼蓝染色法检测人骨髓MSC的细胞活性，活细胞染色显示细胞膜周围为蓝色，细胞内部为白色;死细胞细胞膜破损，染料进入细胞内部，染色显示整个细胞呈蓝色；b.6个人骨髓MSC在5个温度条?
【参考文献】

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2 赵明亮;陈以胜;李晓红;王景景;涂悦;孙洪涛;张赛;陈翀;;颅脑创伤后的化学微环境对温敏脐带间充质干细胞增殖和分化的影响[J];中国应用生理学杂志;2015年03期

3 陈京;季明芳;李晓玲;方慧云;余元龙;程伟民;;临床治疗用人骨髓间充质干细胞保存条件的研究[J];国际检验医学杂志;2014年12期

4 林娜;陈津;付云烽;施小华;王庆华;谭建明;;温度和二氧化碳变化对大规模培养脐带间充质干细胞的影响[J];中华细胞与干细胞杂志(电子版);2012年01期

【二级参考文献】

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2 Tokiko Nagamura-Inoue;Haiping He;;WJSC 6~(th) Anniversary Special Issues(2):Mesenchymal stem cells Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells:Their advantages and potential clinical utility[J];World Journal of Stem Cells;2014年02期

3 孙瑞婷;陈瑶瑶;王华;靳继德;汪劲松;刘冬梅;王立生;吴祖泽;;脐带来源间充质干细胞的制备及其质量检定[J];中国医药生物技术;2013年06期

4 孙凤仙;王曼;徐艳玲;林来祥;徐淑梅;;β片层阻断肽联合人脐带间充质干细胞对APP转基因鼠的治疗作用[J];中国应用生理学杂志;2013年03期

5 刘洪良;刘晓智;刘振林;姜忠敏;盛凤;李罡;;ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析[J];天津医药;2012年03期

6 ;《干细胞临床转化指南》:干细胞临床应用标准与规则[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年36期

7 徐燕;李长虹;孟恒星;郝牧;邱录贵;;人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年32期

8 毕薇薇;郭立斌;李志刚;;人脐带源间充质干细胞的培养及生物学性状[J];中国现代医学杂志;2009年10期

9 梁翠铭;黄敏;;人干细胞的采集分离和保存及临床应用[J];检验医学与临床;2007年12期

10 袁源;杨树源;韩忠朝;张晓辉;;人脐带间充质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究[J];中华实验外科杂志;2006年01期

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4 孙璇;毛念渝;刘明珠;董传明;;间充质干细胞来源外泌体在皮肤损伤修复中的研究进展[J];系统医学;2019年16期

5 刘超;张丽君;陶昊;杜心洁;王芮;李文菁;丁淑梅;王怡;姜磊;黄玉香;;基于细胞生物学方法比较5种不同组织来源间充质干细胞的特征[J];中国组织工程研究;2019年33期

6 阿诺得 卡普兰;廖联明;王萍;谭建明;;间充质干细胞更改名称的时候到了[J];中华细胞与干细胞杂志(电子版);2017年05期

7 陈俊秋;黄梁浒;;间充质干细胞及其外泌体促血管再生的分子机制研究进展[J];中国实验血液学杂志;2018年06期

8 赖秀蓝;马廉;;间充质干细胞的临床应用及产业化前景[J];中国小儿血液与肿瘤杂志;2016年06期

9 陶一昕;马钢;;皮肤间充质干细胞的研究进展[J];中国科学:生命科学;2017年04期

10 刘聪;张墨;Hong-Long Ji;;间充质干细胞的恶性转化研究进展[J];中华细胞与干细胞杂志(电子版);2017年04期

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7 侯克东;人脐带Wharton胶中间充质干细胞生物学特性及组织工程软骨体外构建的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年

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本文编号：2877553