TAC-NFAT轴调控GRβ在拮抗糖皮质激素快速减敏的作用机制

发布时间：2020-11-13 05:22

　　 目的探究TAC-NFAT轴调控GRβ在拮抗糖皮质激素快速减敏中的作用机制。方法 1%DNCB重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建慢性接触性皮炎动物模型,以未经处理的模型小鼠为对照组,并分别用DEX、TAC、DEX+TAC处理该动物模型。通过HE染色、炎症细胞计数、qRT-PCR检测TNF-α的表达水平反映不同处理组皮炎的变化情况,同时采用q RT-PCR和Western blot检测糖皮质激素受体β(GRβ)的mRNA和蛋白表达。TAC作用角质细胞NTCC2544后,Western blot检测NFAT1和NFAT2的表达水平。构建含GRβ启动子序列的荧光素酶报告载体pGL3-basic-GRβ,双荧光素酶报告基因实验验证NFAT作用于GRβ启动子区域。结果与对照组相比,DEX能够显著降低DNCB诱导的小鼠慢性接触性皮炎的炎性反应。与DEX处理组、TAC处理组相比,DEX+TAC处理组炎症细胞计数与TNF-α表达均显著降低(P0.05),GRβ的mRNA和蛋白水平表达显著降低(P0.05)。体外实验显示TAC能够抑制人角质细胞NCTC2554 GRβ的表达,并呈剂量依赖性,同时TAC也能够抑制NFAT1和NFAT2的表达。双荧光素酶报告基因实验证实NFAT1和NFAT2能够作用于GRβ的启动子序列区域。结论 TAC通过TAC-NFAT轴调控GRβ的表达而拮抗糖皮质激素快速减敏。该发现为临床工作中TAC与GC类药物的合理使用提供了一定的实验基础。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂与动物
    1.2 动物模型的建立
    1.3 病理组织切片染色（HE）
    1.4 皮肤组织RNA提取
    1.5 定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）
    1.6 TAC作用NCTC2544人角质细胞
    1.7 双荧光素酶实验验证NFAT增强GRβ启动子的活性
    1.8 Western blotting
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 HE染色及TNF-α检测评价DEX、TAC和DEX+TAC的抗炎作用
    2.2 qRT-PCR和Western blot检测GRβmRNA和蛋白表达
    2.3 TAC抑制人角质细胞NCTC2544 GRβ的表达
    2.4 NFAT1、NFAT2调控GRβ转录表达
3 讨论

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本文编号：2881792