人胎盘间充质干细胞的扩增与鉴定

发布时间：2020-11-16 05:35

　　 背景:作为组织工程的种子细胞,胎盘间充质干细胞因具有多向分化、低免疫原性、免疫调节等作用,被广泛用于临床疾病的治疗及临床科研中。目的:根据间充质干细胞的定义来鉴定从宁夏医科大学总医院干细胞研究所获得的人胎盘间充质干细胞,为后续的实验提供可靠的保障。方法:培养从宁夏医科大学总医院干细胞研究所获得的人胎盘间充质干细胞,观察其在塑料培养皿或培养瓶内的贴壁情况,并间断观察细胞形态发生的变化。将培养的第3代人胎盘间充质干细胞通过流式细胞技术检测细胞表面特异性抗原,并且用成脂、成骨、成软骨诱导培养基分别诱导21 d后,采用油红O、茜素红、甲苯胺蓝进行细胞染色观察人胎盘间充质干细胞向脂肪、骨,软骨细胞的分化能力。实验方案得到宁夏医科大学总医院医学科研伦理审查委员会批准(编号:2018-047)。结果与结论:(1)经过体外培养的第3代人胎盘间充质干细胞呈漩涡状贴壁生长,单个细胞呈梭状,形似纤维细胞;(2)人胎盘间充质干细胞具有特殊的细胞免疫学表型:流式细胞术检测CD105、CD90、CD73呈强阳性表达;造血标记物CD34、CD45、CD14以及HLA-DR呈阴性表达;(3)人胎盘间充质干细胞在成脂、成骨、成软骨诱导培养21 d后,油红O染色、茜素红染色及甲苯胺蓝染色均呈阳性。提示:根据间充质干细胞的定义,来自宁夏医科大学总医院干细胞研究所的人胎盘间充质干细胞符合间充质干细胞的特性,为后续实验提供良好保证。
【部分图文】：

软骨诱导分化第14天，局部细胞已聚集成簇，如箭头所指；C为诱导分化第21天，箭头所指聚集成簇的细胞团逐渐变为球形；D为阴性对照组，人胎盘间充质干细胞仍呈梭状贴壁生长。标尺：50μm。图7人胎盘间充质干细胞向软骨细胞诱导分化(倒置显微镜，×200)Figure7Chondrogenicdifferentiationofhumanplacentalmesenchymalstemcells(invertedmicroscope,×200)图注：图A为诱导分化21d后成软骨细胞被甲苯胺蓝染成蓝色；图B箭头所指为聚集呈球状的软骨细胞被染成深蓝色。标尺：100μm。图8人胎盘间充质干细胞向软骨细胞诱导21d甲苯胺蓝染色鉴定(倒置显微镜，×100)Figure8Toluidinebluestainingofhumanplacentalmesenchymalstemcellsafter21daysofchondrogenicdifferentiation(invertedmicroscope,×100)
【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2885678