重组两歧双歧杆菌疫苗的构建、鉴定、表达及其免疫保护力研究

发布时间：2020-12-03 17:05

　　目的 构建铜绿假单胞菌重组（r）两歧双歧杆菌（Bb）疫苗,研究疫苗免疫后铜绿假单胞菌攻击小鼠的免疫保护力。方法 将PCR扩增的铜绿假单胞菌重组外膜蛋白H（OprH）基因克隆至载体pGEX-1λT,电穿孔转化两歧双歧杆菌,得到rBb-pGEX-OprH疫苗。将疫苗进行PCR鉴定,再以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析,并行蛋白质免疫印迹（Western blot）鉴定。将21只BALB/c小鼠按照随机数字表法分为rBb-pGEX-OprH疫苗组（简称疫苗组）、空载体组和Bb对照组（每组7只）,分别用rBb-pGEX-OprH、rBb-pGEX-1λT或Bb行灌胃免疫,每天1次,连续3 d,持续3周,于首次免疫后4周以5 × 107菌簇形成单位（CFU）铜绿假单胞菌滴鼻攻击,每天1次,连续3 d。攻击2周后处死小鼠,计数肺细菌负荷。另于免疫前、首次免疫后4周、攻击感染后2周取静脉血,酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定小鼠血清IgG水平。结果 PCR扩增出660 bp的OprH基因；PCR鉴定显示,rBb-... 

【文章来源】：中华地方病学杂志. 2019年01期 第31-35页

【文章页数】：5 页

【参考文献】：
期刊论文
[1]日本血吸虫重组两歧双歧杆菌疫苗的构建及其表达[J]. 罗广旭,李文桂,覃婷.  中华地方病学杂志. 2017 (04)
[2]2015年全国细菌耐药监测报告[J]. Committee of Experts on Rational Drug Use, National Health and Family Planning Commission of the P.R.China;China Antimicrobial Resistance Surveillance System;.  中国执业药师. 2016(03)
[3]铜绿假单胞菌外膜蛋白H原核表达、多克隆抗体制备及免疫保护作用[J]. 刘祥.  第二军医大学学报. 2015(10)
[4]记忆B细胞免疫应答机制研究进展[J]. 吕进,宋秀军,宿娟,江其生.  中国免疫学杂志. 2015(02)
[5]双歧杆菌质粒载体的研究与应用[J]. 王丽群,孟祥晨.  中国乳品工业. 2008(08)
[6]乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达[J]. 徐波,曹郁生,陈燕,郭兴华.  微生物学报. 2007(04)



本文编号：2896445