重组腺病毒介导HAV结构蛋白基因表达及其表达产物的免疫学性质研究

发布时间：2020-12-07 00:51

　　为了探讨复制缺陷型重组腺病毒作为发展病毒基因工程疫苗，尤其是口服病毒疫苗的有效性和可能性，本文以甲型肝炎病毒结构基因vp3+vp1作为目的基因，人腺病毒5型做载体，研究了重组腺病毒在体外的生物学及免疫学性质，比较了不同途径接种实验动物后的免疫学效应。通过RT-PCR方法，从经传代减毒的甲型肝炎病毒吕-8株P25毒种的RNA中分离了其结构蛋白基因（vp3+vp1），克隆到真核表达质粒pCMV₂ΔBamH Ⅰ的人巨细胞病毒立即早期启动子之下，将目的表达盒CMV-HAV-polyA插入腺病毒穿梭质粒pXCX₂Not Ⅰ。利用磷酸钙-DNA共沉淀技术，将线性化穿梭质粒pXCX₂-CMV-HAV与E1区缺失的复制缺陷型腺病毒载体质粒pJM17共转染293细胞，通过胞内同源重组，产生复制缺陷型重组腺病毒rAdHAV。rAdHAV可引起典型的细胞病理效应（CPE），PCR及RT-PCR方法证明外源目的基因已插入腺病毒载体。rAdHAV感染非许可性细胞（MA104）后可检测到特异性荧光灶，蛋白印迹表明为特异性表达产物，在电子显微镜下观察... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

rAd感染293细胞的形态学变化图

PCR鉴定d

PCR反应鉴定3伙d


本文编号：2902310