Nrf2/HO-1信号通路在人诱导性多能干细胞氧化应激中的作用

发布时间：2020-12-07 05:53

　　氧化应激是诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cell, iPSC）在培养和应用中遇到的一个关键问题,探讨其作用机制具有重要的理论和实践意义。目前有关iPSC氧化应激的研究相对较少,Nrf2/HO-1信号通路在其中的作用尚不明了。因此,本研究以不同浓度的H₂O₂（100、200、300、400μmol/L）处理人iPSC（hiPSC）,分别在4 h和24 h于倒置显微镜下观察hiPSC及其饲养层细胞SNL氧化损伤的程度,通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, AP）试剂盒和超氧化物阴离子荧光探针,分别检测hiPSC多能性和细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平,并通过qRT-PCR检测H₂O₂处理4 h后早期应激状态下Nrf2和HO-1 mRNA的表达水平,免疫细胞化学和Western印迹检测p-Nrf2和HO-1蛋白质的表达量。结果表明:hiPSC和SNL细胞的ROS水平呈H₂O_... 

【文章来源】：中国生物化学与分子生物学报. 2019年07期 第794-802页 北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 hiPSC培养和H2O2处理
    1.3 碱性磷酸酶活性检测
    1.4 ROS水平检测
    1.5 qRT-PCR检测Nrf2和HO-1 mRNA表达量
    1.6 免疫细胞化学检测p-Nrf2和HO-1蛋白质的表达
    1.7 Western印迹检测p-Nrf2和HO-1蛋白质表达水平
    1.8 统计学处理
2 结果
    2.1 H2O2处理导致hiPSC和SNL细胞损伤和死亡
    2.2 H2O2处理导致hiPSC多能性降低
    2.3 H2O2处理增加了hiPSC和SNL细胞的ROS水平
    2.4 H2O2 处理增强了hiPSC和SNL细胞中Nrf2/HO-1 mRNA的表达
    2.5 H2O2处理后hiPSC中p-Nrf2/HO-1蛋白质的表达增加
    2.6 H2O2处理后hiPSC中p-Nrf2/HO-1的蛋白质表达水平升高
3 讨论



本文编号：2902751