细胞外基质对背根神经节细胞生长分化的影响

发布时间：2020-12-07 08:40

　　背根神经节细胞（DRG）是外周神经系统中感受、传导痛觉的重要细胞,多聚赖氨酸是神经细胞体外培养常用的细胞外基质（ECM）,但不同类型、不同浓度的多聚赖氨酸对背根神经节细胞生长分化的具体影响目前仍未阐明。目的:本项目旨在探讨不同类型、浓度、分子量的多聚赖氨酸对大鼠背根神经节细胞生长分化的影响。方法:分别从时间梯度、浓度梯度以及不同分子量这三个方面研究D型及L型多聚赖氨酸对大鼠背根神经节细胞分化率及平均突起长度的影响。结果:实验结果表明,正常工作浓度下用L型多聚赖氨酸作为基底材料培养细胞48 h时对细胞突起长度有一定的促进作用;当D型、L型多聚赖氨酸的浓度分别降低至5 g/ml、20 g/ml时,细胞在L型多聚赖氨酸包被的玻片上分化更好;而普通分子量（3-7 W）或高分子量（>30 W）的D型多聚赖氨酸对背根神经节细胞的生长分化无显著影响。 

【文章来源】：科教导刊(中旬刊). 2019年10期 第81-83页

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

不同相对分子质量的D-PL对DRG细胞生长的影响

822019年/第29期/10月（中）取出老鼠脊柱，并沿脊椎剖成两半，从脊髓侧面取出背根神经节（DRG）。剔净DRG周围的组织并充分剪碎至糊状。将剪碎后的DRG放入2ml消化酶中消化30min，每隔5min拿出来轻轻吹打。取出一滴消化液，放置显微镜下观察，若看到消化成单个浑圆的细胞，则停止消化，否则继续消化。消化结束加入3mL培养基，1000g离心3min。弃上清，加适量培养基，重悬。滴片，将细胞放入CO2培养箱中培养2h使其贴壁，待细胞贴壁后加入培养基培养。1.2.2固定及细胞成像固定：吸出培养基，每孔加入400l4%的PFA溶液，室温下固定15min，贴片。细胞成像：贴片后，每类样本在激光共聚焦显微镜放大60倍下分别随机选取6-10个视野，进行成像处理。2结果2.1常用工作浓度L、D型多聚赖氨酸对DRG生长分化的影响本次实验通过统计比较DRG细胞的分化率，平均突起长度，观察D型和L型多聚赖氨酸对细胞生长分化的影响。常用工作浓度为100g/ml的L-PL及25g/ml的D-PL，用这些ECM包被玻片，超纯水水洗晾干后培养细胞。当某个细胞的突起总长度大于这个细胞胞体直径的2倍时，我们一般认为此细胞属于已分化细胞。分别对培养12h、24h、48h、72h的DRG细胞统计分析分化率和突起长度，结果如图1所示。从图1(A)可知，在12-72h的分化率没有显著差异，说明在72h内，L和D型多聚赖氨酸对DRG细胞的分化率的影响无显著差异，而从图1(B)可知，培养至48h时DRG的平均突起长度有明显差异（进行t检验可得P值小于0.01）。因此，我们可以认为，L型多聚赖氨酸在细胞成长48h时对细胞的突起长度有一定的促进作用。2.2不同浓度梯度L、D型多聚赖氨酸对DRG生长分化的影

【参考文献】：
期刊论文
[1]退变和健康椎间盘组织提取细胞外基质诱导背根神经节轴突生长的差异[J]. 张辉,刘林,薛文.  中国组织工程研究. 2014(07)
[2]新生大鼠前扣带皮层神经元的原代培养[J]. 李芸,王红,王波,许永广,张孟元,王公明.  山东大学学报(医学版). 2011(05)
[3]大鼠背根神经节酸感受离子通道(ASICs)的药理学特性研究[J]. 艾平,刘振伟,戴薇薇,张树卓,郑建全.  中国药理学通报. 2007(01)
[4]神经干细胞克隆在不同细胞外基质上的生长特性[J]. 许汉鹏,苟琳,杨浩,王春婷,鞠躬.  解剖学杂志. 2004(03)
[5]大鼠海马神经元无血清原代培养技术的建立[J]. 任铁玲,胡前胜,傅洪军,董胜璋.  中国卫生检验杂志. 2004(02)
[6]新生大鼠海马神经元原代培养方法的研究[J]. 王英,车宇,苗建亭,李柱一,王者晋.  细胞与分子免疫学杂志. 2003(02)



本文编号：2902962