新型热休克蛋白HSP-DC激活树突状细胞及其佐剂效应研究

发布时间：2020-12-07 10:28

　　抗肿瘤免疫和抗感染免疫的关键点之一是诱导机体产生抗原特异性的Th1型免疫应答。利用免疫佐剂调节免疫反应使其向Th1型免疫应答偏向是一种可行的方式。传统佐剂以福氏佐剂为代表，主要诱导抗体产生，以Th2型免疫应答为主。随着免疫学研究的进展，一些新的具有佐剂作用的物质不断被发现，并逐步形成新一代的佐剂。新一代佐剂主要是一些免疫刺激物质和细胞因子，其中包括IFN-γ、IL-12、LPS、lipid A和CpG等。佐剂辅助抗原激发机体产生免疫反应，几乎都与抗原递呈细胞（Antigen-presenting cells,APC）尤其是树突状细胞（Dendritic cells,DC）的作用有关。近年来，大量研究发现热休克蛋白（Heat shockprotein,HSP）家族的许多成员具有佐剂效应，而且主要诱导机体产生抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL，以Th1型应答为主。HSP由于具有独特的佐剂效应而受到免疫学界的广泛关注。 HSP-DC（HSP derived from DC,HSP-DC）是我们从人外周血单核细胞来源的DC cDNA文库通... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

原核表达载体pQE30Fig.1IllustrationofveetorPQE30

925月21图3Fig.3重组表达质粒pQE30一HSP一Dc的酶切鉴定VeetorPQE30一HSP一DCeuttedbyBamHIandSmallane1.PQE30一HSP一DC:lane2.PQE30p以·30/Hs卜oeSma9工旦旦歹〔coRI/RBS}A下曰八G该GC人下CG6幼伯5...._么omHI_】GG八TcCG丁036HSP~DC八丁口GCGOCC八TCGG人GTTCACCTO口GCTGC^CCTC人GCATGTGAGGCCGTCt氏t八八GG八丁GGCCGGGCC^G^TCCTGGGC^G人八GCTCC八仔TG八了CC八C八AGCTC^G八八八T氏CATCGCGGAA^GTAAATGTTTAGT八八G八丁OTTGCCAGACT口AT八TTTAGTAAAATGA八AG八八八CGGC人CATTCTG认TTGGGCTCAGATGCJ过叫GTD57乙江以肠卫二刀凶生蛆工巧刀戈CGTTTG八忿TTTG仔人GA人入八仔CA八八八八人人TGCTCTTGG八G八八GCAGC认GAGCTGCTGG八TTTAATGTTTTGC仔从TT八八TTCACG八入CC仔TCT仔CAGCTCTTCTTGCTTATGGAATTGGAC八八GACTCCCCI民CT仔G人八燕人^OC八AT八TTTTGGTGTTT八八GCTTGGAGGAAC八TCCTI氏TCTCTCAGCGTCATGGA八GTTA八CAGTGGAATA亡汀CG仔GTTCT了TC八八CA八ACACTG八TGAI八AC八TC仔GTGGTGCACATTTCACAGA^AccT“GcAC^GTATc认。CTTcTG^OTTCc~GATCcTTc^MC^TG竺竺竺些三生。Tos。GGAA八了GCGCGAGCCATGA丁GA八八T认ACGAAC八GTGC赵翻以巨及屹口山侧准山比刀江工山CCTTGGG八入GTGCC八八CTGTTTTCTTGACTCATT八T民TG八八GGTCAAGATTTTG八TTGCA八TGTGTCC^6八GC^AGATTTG人ACTTCTTTGTTCTCCACTTTTt八八t氏^GTGt八TAGAAGC八八TCA6八GGACTCT丁次G八TC八A八入TGG人TTT叭CAGCAG八TG八TATC八AC八AGGTTGTCCTTTGTGGAGGGTCTTCTCGA八丁CCC八满A仔Cl民CA‘C^^cTG^T一

重组pQE3o一HSP一oe质粒转化表达宿主菌M15，在ZYT中用lmMIPTo诱导表达4小时，出现明显的一条重组表达蛋白带，分子量约为56kD，而经同样诱导的pQE30空载体转化的M巧没有这一蛋白条带(图5)。HsP一Dc的理论分子量为54.8kD，加上pQE30表达框编码的引导肤(序列为MRGSHHHHHHGS，计算分子量1.4kD)。因此，表达的重组蛋白与预测的His一HSP一DC目的蛋白的分子量相近。表达HSP一DC重组蛋白的细菌经超声破菌，发现目的蛋白主要在包涵体中。由于一些HSP能结合LPS，为得到无LPS污染的重组HSP一DC蛋白，我们选择充分洗涤包涵体，然后从包涵体通过变性复性获得目的蛋白的纯化路线。97ko66koHSP一DCMW:56ko43ko31ko2。k。蘸{矍翼靴叱口蕊然粼图5重组HSP一DC蛋白的诱导表达Fig.5ExPressionofreeombinantHSP一DCProteininM15byIPTGM:Proteinmarker:l:inelusionbodiesfromindueedPQE30一HSP一DC/M15:2:refoldedHSP一DCProteinonNi一NTAeo]umn:3


本文编号：2903094