胞膜-6A8-α-甘露糖苷酶

发布时间：2020-12-14 14:28

　　6A8 cDNA是本实验室克隆到的，长3300bp，从57-3242bp为一开放阅读框架，同源性分析高度提示6A8 cDNA编码的蛋白质可能是一种α-甘露糖苷酶。另外，用于克隆6A8 cDNA的单抗是用活的人B细胞3D5免疫小鼠，并用活3D5细胞作靶细胞筛选到的，因而提示6A8 cDNA编码的蛋白质可能也表达于细胞膜。本论文工作的目的就是：1)确证6A8蛋白质为一种α-甘露糖苷酶；2)6A8蛋白质在细胞中的定位，检测它是否也表达于胞膜，是一种胞膜酶。 为了确证6A8蛋白质的α-甘露糖苷酶本质，我采用分子克隆重组技术将本室克隆到的3个6A8 cDNA片段连成一个完整的3300bp cDNA，经测序完全正确，再将它插入真核表达载体pCDNA3中，在COS-7细胞中获得瞬时表达。以野生型及转染空载体的COS-7细胞作对照。观察到转染6A8 cDNA-pCDNA3的COS-7细胞蛋白匀浆上清液对p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside的酶解作用增强，且不被swainsonine抑制。用单抗6A8作探针行Western Blotting，见分子量为120KDa的蛋... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

.pBV220一6A8、pGEM一TEasy一6A8和pYEFP一Nl一6A8的酶切鉴定IdentifieationofPBV220一6A8、PGEM一TEasy一6A8andPEYFP一NI一6八8by

中国协和医科大学博士学切鉴定。pBV22O一6A8中的2908bp片段与pGKpnl/Trugl/ECoRI酶切后连接于pEYFP一NI中，鉴定。所连接的cDN八经测序，表明符合6A8cMZ321MI

pCDNA3一6A8cDNA的酶切鉴定Fig6.IdentifieationofpCDNA3一6A8byrestrietionenzymes

【参考文献】：
期刊论文
[1]6A8 cDNA编码一种α-甘露糖苷酶[J]. 史耕先,马凤蓉,朱立平,张立新,赵方萄,刘音,王讯.  中国医学科学院学报. 1999(06)
[2]编码与大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人6A8cDNA在真核细胞的表达[J]. 张立新,马凤蓉,朱立平,李波,石伟,张淑珍,李国燕,王汛,赵方萄.  中华微生物学和免疫学杂志. 1998(04)
[3]一个与编码大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人cDNA分子克隆[J]. 张立新,朱立平,石伟,马凤蓉,祝庆麟,张淑珍,王汛,李国燕.  中华微生物学和免疫学杂志. 1997(01)



本文编号：2916554