弯曲菌的分离培养及分型分析

发布时间：2017-04-08 07:18

  本文关键词：弯曲菌的分离培养及分型分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：弯曲菌(Campylobacter)是主要的食源性致病菌,广泛存在于家禽家畜的肠道和自然环境中。宿主的排泄物可以污染食物和水源,造成人类和其他动物感染弯曲菌。对人致病的弯曲菌中最常见的是空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,简写为C.jejuni)和结肠弯曲菌(Campylobacter coli,简写为C.coli),引起的最常见症状是腹泻性肠炎,格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)是弯曲菌感染后最严重的并发症。在发达国家,弯曲菌感染引起的腹泻病例数超过沙门菌和志贺菌,使弯曲菌成为最常见的腹泻致病菌。在发展中国家,空肠弯曲菌是儿童腹泻死亡的重要病原。腹泻病人弯曲菌感染的检测及鉴定方法较多,感染诊断的“金标准”是从粪便中分离到弯曲菌。国际国内关于弯曲菌分离培养方案较多,但对于病人粪便中弯曲菌的分离鉴定未见统一标准,因此优化一种适用于病人粪便标本中弯曲菌的常规分离培养方案对于弯曲菌感染的检测具有重要意义。本研究通过模拟实验,从培养基、培养条件等方面对粪便中弯曲菌的分离培养进行实验室优化,选择优化方案对北京和河北两家医院腹泻病人进行标本的收集及弯曲菌的检测。 家禽作为弯曲菌贮存的主要宿主,其较高的感染率对人类健康带来很大威胁。国内关于鸡群中弯曲菌的携带率报导高低不一。为进一步了解我国家禽中弯曲菌的携带情况,本研究组收集北京规模化养殖场不同品系鸡的泄殖腔拭子进行弯曲菌的分离培养,结果提示因饲养时间长短不同而致不同品系鸡弯曲菌携带率不同,蛋鸡(8-12个月)弯曲菌的平均携带率为30%,短期养殖屠宰前肉鸡粪便标本中未检出弯曲菌。随机抽取部分短期饲养肉鸡(42天)肛拭子标本使用荧光定量PCR法直接检测弯曲菌,也未发现感染。此外,2012年以来,美国等发达国家频繁报道弯曲菌污染鸡肝导致的弯曲菌病的暴发,为了解我国鸡肝中弯曲菌的污染情况,本研究收集北京和石家庄的鸡肝进行弯曲菌的分离培养。结果北京采样鸡肝弯曲菌的分离率为41%,石家庄鸡肝中未检出弯曲菌。鸡肝标本微需氧选择性分离培养弯曲菌过程中分离到变形杆菌和鸡螺杆菌,变形杆菌的污染、覆盖可能是石家庄地区鸡肝样品弯曲菌检出失败的原因。研究证明,鸡螺杆菌是导致腹泻的病原菌之一,鸡肝中鸡螺杆菌的检出提示污染的鸡肝可能成为我国腹泻患者食源性感染的危险食品。 分子分型技术在食源性致病菌暴发识别、溯源调查、流行趋势分析及耐药相关背景研究中已经广泛应用,脉冲场凝胶电泳(PFGE)因分辨率高成为病原分型甄别的重要手段,而多位点序列分型方法(MLST)操作简单并有国际可比对的数据库也已广泛用于病原菌的进化研究。已有大量文献使用PFGE或(和)MLST技术进行弯曲菌病暴发的识别、流行趋势的预测及弯曲菌进化、不同宿主来源菌株的遗传相关性的研究。使用PFGE方法分型结果显示不同宿主来源弯曲菌散布在不同组群中,没有明显的宿主特异性。但对32株鸡肝来源弯曲菌聚类分析,结果同一市场同一批次鸡肝分离的弯曲菌有聚集性,提示鸡肝在超市包装或屠宰场加工过程中可能存在交叉污染。使用MLST技术对我国477株不同宿主来源的弯曲菌作最小生成树分析菌株间的遗传相关性,结果表明我国不同宿主来源空肠弯曲菌菌型多样、分散,未见明显聚集性,但腹泻患者菌株与家禽来源菌株的菌型有高度一致性,而不同宿主来源结肠弯曲菌有明显的聚集性,83%属于ST-828complex。使用统计软件对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的7个管家基因的等位基因在宿主水平进行分布差异的比较,结果人源和禽源空肠弯曲菌有4个管家基因的等位基因有差异,而人源、禽源及畜源结肠弯曲菌只有2个管家基因的等位基因有差异,尤其是特定等位基因只出现于特定的宿主,提示等位基因可能有宿主特异性。
【关键词】：弯曲菌 分离鉴定 感染率 分子分型 遗传多样性
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378
【目录】：

• 缩略词5-7
• 论文摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一部分 粪便标本中弯曲菌分离培养的实验室优化12-23
• 前言12-14
• 材料方法14-17
• 结果17-21
• 讨论21-22
• 小结22-23
• 第二部分 不同来源标本弯曲菌的分离培养23-50
• 前言23-26
• 材料方法26-33
• 结果33-46
• 讨论46-49
• 小结49-50
• 第三部分 弯曲菌的分子分型分析50-66
• 前言50-51
• 材料方法51-57
• 结果57-64
• 讨论64-65
• 小结65-66
• 参考文献66-79
• 综述79-86
• 参考文献82-86
• 论文发表情况86-87
• 致谢87

【参考文献】

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  本文关键词：弯曲菌的分离培养及分型分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：292364