丙型肝炎病毒高变区1高反应性多肽筛
发布时间：2020-12-25 15:19
高变区1（HVR1）是位于丙型肝炎病毒（HCV）被膜蛋白E2氨基端的高度异质性的一段序列，被认为是宿主体液免疫中和抗体的重要靶位，但其株特异性可导致部分病毒逃避宿主的免疫识别和感染的持续。虽然如此，HVR1序列中存在较保守的位点，通过合适的HVR1免疫程序，仍可能诱生出保护性抗体。本研究对来自中国不同地区的HCV HVR1进行了序列特性分析，在综合考虑地域因素和基因型的差别、亲水性和免疫原性的基础上，首先在大肠杆菌中表达了四种DHFR-HVR1融合蛋白，检测了它们与HCV感染者血清反应性，其中SH1b的反应率最高，为66.67%；初步分析提示患者免疫反应的强度可能与干扰素疗效有关。所得融合蛋白纯化后免疫家兔获得了相应的抗体。将其中三个HVR1片段分别连接至乙型肝炎病毒表面抗原片段的羧端，表达了HBs-HVR1融合蛋白。为进一步提高HVR1序列的交叉反应性，采用DNA shuffling的方法体外重组31株从丙肝患者血清中获得的HVR1 cDNA自然序列，构建HVR1模拟序列噬菌体展示文库，通过抗HVR1多克隆抗体的亲和筛选， 其反应性从46.7%-66.7% 提高到 53.3%-80%...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海生命科学研究院)上海市
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HCV基因组结构示意图
图 2 pGEM-T 质粒结构图。“→”表示 HCV 片段插入部位。2.6 序列分析及统计学方法序列同源性比较采用 GCG（10.0）软件包中的 gap 程序。疏水性分析采用 Ky& Doolittle 方法(51)。多肽序列抗原性预测采用 EMBOSS 软件包中的 antigen程序(52)。复旦大学联合基因科技集团协助分析。结果与讨论1. HVR1 克隆株序列测定从13名患者血清标本中随机挑选31株HCV克隆，其中II(1b)型26株和III(型 5 株。 HVR1cDNA 测序结果及其推导的相应氨基酸序列见图 3-1 及 3-2。
图 4 HCV 株 E1、E2/NS1 区氨基酸序列疏水性预测图。横轴代表HCV 株E1 及部E2/NS1 区氨基酸位置，图中位置 0－330 相当于实际氨基酸位置 aa191－521；H位于图中 193－220 之间。纵轴代表氨基酸的疏水性，0 以上的正值代表氨基酸有疏水性，0 以下的负值代表氨基酸具有亲水性。HCV-SH2 即为以下文中的 SH1HCV-BJ2 即为 BJ1b，HCV-SD2 即为 SD1b，HCV-SD3 即为 SD2a。3. HVR1 区推导的氨基酸序列免疫原性预测结果采用计算机软件预测部分 HCV 株 HVR1 区氨基酸序列的免疫原性，具有免疫性的区域如下(其免疫原性按从大到小顺序排列)：HCV-SH1b： aa408－414，aa394－406HCV-SH1b’：aa408－414，aa399－406HCV-SH2a： aa399－406
【参考文献】：
期刊论文
[1]Expression of hepatitis C virus hypervariable region 1 and its clinical significance[J]. Xin-Xin Zhang Jing Liu Yuan Wang State Key Laboratory of Molecular Biology,Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences,Shanghai,200031,China Xin-Xin Zhang Shen-Ying Zhang Zhi-Meng Lu Department of Infectious Diseases,Rui Jin Hospital,Shanghai Second Medical University,Shanghai,200025,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(05)
[2]DNA immunization with fusion genes encoding different regions of hepatitis C virus E2 fused to the gene for hepatitis B surface antigen elicits immune responses to both HCV and HBV[J]. Jing Jin Jian-Ying Yang Jing Liu Yu-Ying Kong Yuan Wang Guang-Di Li,Institute of Biochemistry and Cell Biology. Shanghai Institutes for Biological Seiences,Chinese Academy of Science,Shanghai 200031,China. World Journal of Gastroenterology. 2002(03)
[3]中国地区HCV株包膜区cDNA序列变异性分析[J]. 蔡倩,邱纪慧,张欣欣,陆志檬. 肝脏. 1999(04)
[4]北京地区46例Ⅱ/1b型HCV高变区1的序列变异研究[J]. 赵军,程云,张鸿飞,李伯安,刘茂昌,李静,曹阳,张建宗,付体权,韩凤连,施红. 中华肝脏病杂志. 1999(02)
本文编号：2937909
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海生命科学研究院)上海市
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HCV基因组结构示意图
图 2 pGEM-T 质粒结构图。“→”表示 HCV 片段插入部位。2.6 序列分析及统计学方法序列同源性比较采用 GCG（10.0）软件包中的 gap 程序。疏水性分析采用 Ky& Doolittle 方法(51)。多肽序列抗原性预测采用 EMBOSS 软件包中的 antigen程序(52)。复旦大学联合基因科技集团协助分析。结果与讨论1. HVR1 克隆株序列测定从13名患者血清标本中随机挑选31株HCV克隆，其中II(1b)型26株和III(型 5 株。 HVR1cDNA 测序结果及其推导的相应氨基酸序列见图 3-1 及 3-2。
图 4 HCV 株 E1、E2/NS1 区氨基酸序列疏水性预测图。横轴代表HCV 株E1 及部E2/NS1 区氨基酸位置，图中位置 0－330 相当于实际氨基酸位置 aa191－521；H位于图中 193－220 之间。纵轴代表氨基酸的疏水性，0 以上的正值代表氨基酸有疏水性，0 以下的负值代表氨基酸具有亲水性。HCV-SH2 即为以下文中的 SH1HCV-BJ2 即为 BJ1b，HCV-SD2 即为 SD1b，HCV-SD3 即为 SD2a。3. HVR1 区推导的氨基酸序列免疫原性预测结果采用计算机软件预测部分 HCV 株 HVR1 区氨基酸序列的免疫原性，具有免疫性的区域如下(其免疫原性按从大到小顺序排列)：HCV-SH1b： aa408－414，aa394－406HCV-SH1b’：aa408－414，aa399－406HCV-SH2a： aa399－406
【参考文献】：
期刊论文
[1]Expression of hepatitis C virus hypervariable region 1 and its clinical significance[J]. Xin-Xin Zhang Jing Liu Yuan Wang State Key Laboratory of Molecular Biology,Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences,Shanghai,200031,China Xin-Xin Zhang Shen-Ying Zhang Zhi-Meng Lu Department of Infectious Diseases,Rui Jin Hospital,Shanghai Second Medical University,Shanghai,200025,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(05)
[2]DNA immunization with fusion genes encoding different regions of hepatitis C virus E2 fused to the gene for hepatitis B surface antigen elicits immune responses to both HCV and HBV[J]. Jing Jin Jian-Ying Yang Jing Liu Yu-Ying Kong Yuan Wang Guang-Di Li,Institute of Biochemistry and Cell Biology. Shanghai Institutes for Biological Seiences,Chinese Academy of Science,Shanghai 200031,China. World Journal of Gastroenterology. 2002(03)
[3]中国地区HCV株包膜区cDNA序列变异性分析[J]. 蔡倩,邱纪慧,张欣欣,陆志檬. 肝脏. 1999(04)
[4]北京地区46例Ⅱ/1b型HCV高变区1的序列变异研究[J]. 赵军,程云,张鸿飞,李伯安,刘茂昌,李静,曹阳,张建宗,付体权,韩凤连,施红. 中华肝脏病杂志. 1999(02)
本文编号：2937909
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/2937909.html
最近更新
教材专著
