结核病Mtb8.4/hIL-12嵌合DNA疫苗的研究

发布时间：2020-12-27 15:11

　　目的： 以IL-12作为分子佐剂，与结核杆菌新抗原Mtb8.4基因连接形成嵌合分子，将其克隆到真核表达质粒中，构建成嵌合DNA疫苗，研究其在小鼠体内诱导细胞免疫应答的效果及对C57BL／6N小鼠的免疫保护作用，为寻求安全、有效、廉价的结核病新疫苗打下基础。 方法： 1．Mtb8.4真核表达质粒的构建及鉴定：用PCR方法从结核杆菌标准株H37Rv基因组中扩增出Mtb8.4基因（包含或不含信号肽），亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1（+），构建成重组质粒pcDNA3.1（+）-Mtb8.4（pM）或pcDNA3.1（+）-MS（pMS），用酶切、PCR和DNA序列分析进行鉴定。 2．Mtb8.4／hIL-12嵌合质粒的构建及鉴定：先以pM和pMS重组质粒为模板，用PCR方法扩增出带有接头（linker）的Mtb8.4基因（Mtb8.4-linker和MS-linker，无终止密码），亚克隆入真核表达质粒pCI-neo中，构建成重组质粒pCI-neo-Mtb8.4-linker（pML）和pCI-neo-MS-linker（pMSL）；再以pORF-hIL12质粒为... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：149 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

Mtbs.4墓因PCRFigl寸.PCRPduetof

L助e1CODtt勺lLane2PCRProductofMt.Mtbs.4gene图1一2Mtbs.4墓因PCR扩增图Figl寸.PCRProduetofMt.袱bs·4gene(二)结核分枝杆菌MS基因(包含信号肤的Mths.4)的PCR扩增:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板，P3和PZ为引物，所得PCR产物3pl在1.7%琼脂糖凝胶中电泳，结果显示，扩增出约360bP的片段，与预期的MS目的基因大小相符，见图1一3。LaneMPUC19DNAIM劝1markerLane1and2PCRProductofMt.MSgeneL阶e3Control图1一3MS基因PCR扩增图Figl一PCRProduetofMLMSgene(三)peDNA3.l(+)一Mtbs.4(pM)重组质粒的鉴定:1.PCR鉴定:以pM重组质粒为模板，Pl、PZ为引物，扩增出约273bP的目的基因片段

peDNA3.i(+)一Mtbs.4

【参考文献】：
期刊论文
[1]基因免疫研究中的一些新动态[J]. 熊思东,徐薇.  国外医学(微生物学分册). 2001(01)



本文编号：2941968