HBV野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA-I表达及调节机制

发布时间：2020-12-28 15:28

　　对乙型肝炎病毒（HBV）野生株及核壳蛋白变异株L97和V60在HepG₂细胞HLA-I表面表达的特性及其调节机制进行初步探讨，试图认识病毒及其变异与宿主细胞相互作用和影响。 构建HBV基因组野生株和核壳蛋白变异株稳定表达载体，提供实验研究的基础材料。通过定点突变技术将1.2拷贝HBV（adr亚型）野生株质粒p3.8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株L97和V60质粒，经序列测定证实nt2189A→C和nt2078C→G。3株质粒转染HepG₂细胞DNA的Southern blot杂交均显示明显的3.8kb杂交带，培养上清均测定出HBV抗原，表明具有生物活性，分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp使能稳定表达。重组载体EBO-WT、EBO-L97和EBO-V60作限制性内切酶酶切鉴定及再次测序确定点突变。 测定HBV野生株和变异株L97、V60诱导HepG₂细胞膜HLA-I／抗原肽复合物表达的强度，探讨各株在宿主细胞HLA-I表面表达的特性及核壳蛋白热点变异对HLA-I表达的影响。3株HBV重组载体及EBO空载体分别... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：39 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

HBv野生株及核壳蛋白变异株质粒转染细胞HBVDNASouthern杂交结果

图6HBv转染细胞内HLA一AmRNA表达M:PCR分子量标准(l543，94，697，515，377，237bP);Lanel:EBO一L97;LaneZ:EBO一WT;Lane3:EBO一V60;Lane4:EBO空载体图7HBV转染细胞内HLA一A蛋白质表达的WesternBlot分析Lanel:EBO一V60;LaneZ:EBO一L97;Lane3:EBO一WT;Lane4:EBO空载体:M:蛋白分子量标准表明HBV上调了转染细胞的HLA一A基因转录水平，其上调水平的差异与转染细胞表面HLA一I表达荧光强度的差别基本一致。W亡Stemblot检测显示3株重组载体转染细胞均呈现明显的45kDa左右的蛋白带，符合HLA一1重链分子量大小，3株HBV呈现的区带强度以L97最强，WT次之，V6O最弱，EBO空载体转染细胞未出现可见的蛋白带(图7)，表明HBV转染细胞内HLA一1蛋白质表达水平明显上调，3株HBV表达水平的差别与其细胞表面HLA一1表达荧光强度的差别趋

转染细胞内HLA一I抗原提呈相关基因的转录水平:PZ、TAPI、几pasin引物用RT一PCR半定量法检测3株O空载体转染细胞内相应基因的转录水平，结果均未TapasincDNA可见的扩增带。3株HBV宿主细胞bp的扩增区带，各株的区带强度无明显差别，EBO微弱的区带(图8，Lane4一7)。实验表明HBV转染H及Tapasin基因转录水平无变化，而TAPI基因转录株和变异株表达水平相似。


本文编号：2943993