p16真核表达载体的构建及其转基因的研究

发布时间：2021-01-04 19:29

　　1993年,Serrano等利用酵母双杂交技术在筛选与人CDK4相关的蛋白时找到一个能有效地抑制CDK4活性、相对分子质量为16 ku的蛋白质,将其命名为p16蛋白。p16基因（p16,MTS1,CDKN2）位于人类第9号染色体短臂2区1带区域(9P²¹)。PCR和Southern杂交证实在黑色素瘤、神经胶质瘤、肺癌、白血病中p16基因经常发生缺失、重排及转录水平表达的丧失。目前p16研究主要集中在肿瘤发生中p16失活方式及作为抗肿瘤药物研究等方面,在转基因动物水平的研究很少。我们构建p16真核表达载体pCR^?3.1/p16,建立其稳定表达的NIH3T3细胞株,应用显微注射法制备携带人p16基因的转基因小鼠,可为将来在个体水平研究p16基因的功能奠定基础。 本研究共分两部分,第一部分是p16真核表达载体的构建及其稳定表达的NIH3T3细胞株的建立;第二部分是用显微注射法制备携带人p16基因的转基因小鼠。 第一部分 p16真核表达载体的构建及其稳定表达的NIH3T3细胞株的建立 实验目的 构建pCR^R

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

重组表达质粒的初步酶切鉴定(EcoRI)

受态大肠杆菌DH5a，从含氨节青霉素的LB平板中随机挑出8个抗性菌落，扩大培养，常规碱裂解法提取质粒，并经EcoRI和Xh0I酶解后，0.9%琼脂糖电泳测定(图1.2，图1.3)。12345678910................~~..............图1.2重组表达质粒的初步酶切鉴定(EcoRI)1一摊一、9一10:8个阳性克隆质粒;3、8:pcRO3.1载体1234M................1:pCR.3.1(EeoRI);兰卫鱼留，艾口2，刃pCR’3.l/pl6(EeoRI):4:pCR’3.1/p16(EeoRI+xhol);一!口扣一二匆M:Marker图1.3重组表达质粒的酶切鉴定2.2表达质粒pcR⑧3.1/p6l的测序重组娜妙3.1/p6l序列测定结果(图1.4)显示p16cDNA碱基序列按照预期方式定向插人表达载体，且接口处序列正确，但是比正常读码框架启始密码子前多了编码8个氨基酸的密码子序列a华名gaccggcggc引交绝gacgac，

图2.5仔鼠基因组DNA讨转基因动物是指以实验的方法导人整合并能遗传给后代的一类动物。转基密结合而产生的基因工程动物，转基因动一起来，使人们能够从时间与空间四维律，除用于建立医学研究的各种转基因动展生物反应器研究，获得人类所需要的的生物制品。自从1980年Go而n等[‘〕报道用原，


本文编号：2957298