Rh缺失型D-个体血清学鉴定和RH基因分析

发布时间：2017-04-10 18:35

  本文关键词：Rh缺失型D-个体血清学鉴定和RH基因分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景 Rh缺失型D--是Rh血型系统中一种十分罕见的基因变异型，其红细胞表面只有D抗原表达，而C、c、E和e抗原表达缺失。RhD--表型个体在怀孕或输血时极易被Rh抗原致敏产生针对C, c, E或e抗原的多种Rh抗体，即抗-Rh17抗体（Hr0），抗-Rh17抗体能与所有含RhCE抗原的红细胞发生凝集，进而引起严重的新生儿溶血病或溶血性输血反应。因此，在临床诊疗过程中，Rh缺失型D--孕妇和患者输血困难始终存在。目前，我们对Rh缺失型D--的研究尚处于初级阶段，其分子遗传机制尚不清晰。国外报道的Rh缺失型D--案例较国内多，其产生原因大致分为两种：⑴RHD基因取代RHCE基因外显子引起RhCE抗原表达缺失；⑵RHD和RHCE基因完整，RHCE基因的转录活性降低引起RhCE抗原表达缺失。国内早期的研究多局限于血清学检测，近十年来的相关研究结果显示，中国人群Rh缺失型D--发生机制可能为RHD和RHCE基因重组, RHCE基因外显子区基因突变及RHCE基因部分缺失或先证者遗传父母双方D--单倍型基因所致。 目的 本研究通过对Rh缺失型D--个体及家庭成员的血清学特征、基因分型及其发生的分子基础和遗传特点进行分析，以期发现新的Rh血型变异体发生的分子机制，从而积累更多的中国人群血型基因结构和多态性相关资料，为血型基因研究技术的日益完善奠定深厚的理论基础。这对于由RH基因变异引起的临床相关疾病的诊断、治疗和预防具有极其重要的价值。 方法 ⑴采用血清学方法，对Rh缺失型D--个体及家庭成员进行ABO血型和Rh血型鉴定，通过抗球蛋白试验、吸收放散试验、抗体筛查确定Rh缺失型D--个体红细胞表面抗原及其体内存在的抗体。⑵运用PCR-SSP（序列特异性引物聚合酶链反应技术）对Rh缺失型D--个体及其家庭成员RH基因多态性位点、RHD和RHCE基因外显子以及Rhesus盒进行基因序列扩增，对其基因分型以及发生的分子基础和遗传特点进行分析。 结果 ⑴患儿红细胞表面存在D抗原，CE抗原完全缺失，表型为D--，其体内存在抗-Rh17抗体，，除与自身红细胞不发生凝集外，与所有谱细胞均发生凝集。父母红细胞表面均存在D，C／c，E／e抗原，表型为DCCee。⑵PCR-SSP基因分型结果显示患儿基因型为RhDCCee，与血清学不符。其父母基因型均为RhDCCee，与血清学表型相符。RHD和RHCE基因外显子以及Rhesus盒进行基因序列扩增证实，患儿及其父母RHD基因外显子无缺失，患儿RHCE基因Exon1、Exon3、Exon4和Exon7存在，Exon5和Exon6缺失，其父母亲RHCE基因Exon5缺失。Rhesus盒检测结果显示患儿及其父母均为RH基因纯合子。 结论 ⑴患儿为Rh缺失型D--个体，其父母为Rh正常表型个体。⑵RHCE基因Exon5、Exon6缺失导致Rh缺失型D--的产生。断裂的RHCE基因无法正常表达相应抗原产生Rh缺失型D--，与国内外报道的其他Rh缺失型D--个体产生机制存在一定的种族和个体差异性。
【关键词】：RhD-- 基因分型 PCR-SSP
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R394
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英文缩略词表8-11
• 引言11-15
• 第一部分 RH 缺失型 D--个体血清学分析15-23
• 1.1 前言15
• 1.2 材料与方法15-18
• 1.2.1 研究对象15
• 1.2.2 主要实验试剂、材料和仪器15-16
• 1.2.3 研究方法16-18
• 1.3 结果18-21
• 1.3.1 血型鉴定18-19
• 1.3.2 抗球蛋白试验19
• 1.3.3 吸收放散试验19
• 1.3.4 不规则抗体筛查和鉴定19-21
• 1.4 讨论21-22
• 1.5 小结22-23
• 第二部分 RH 缺失型 D--个体 RH 基因分析23-41
• 2.1 前言23-24
• 2.2 材料与方法24-33
• 2.2.1 研究对象24-25
• 2.2.2 主要实验试剂、材料和仪器25
• 2.2.3 研究方法25-33
• 2.3 结果33-37
• 2.3.1 RHCE 基因分型33-34
• 2.3.2 RHCE 基因外显子序列分析34-35
• 2.3.3 RHD 基因外显子序列分析35-36
• 2.3.4 RHD 基因 Rhesus 盒 PCR-SSP 检测36-37
• 2.4 讨论37-39
• 2.5 小结39-41
• 结论41-43
• 参考文献43-47
• 综述47-61
• 参考文献58-61
• 致谢61-62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：297333