转化生长因子β激活激酶1转基因小鼠模型的建立及相关研究

发布时间：2017-04-11 10:05

  本文关键词：转化生长因子β激活激酶1转基因小鼠模型的建立及相关研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：建立人活化型TAK1和失活型TAK1的转基因小鼠,利用转基因动物模型初步观察TAK1过表达对牙齿釉质形态的影响。检测TAK1转基因小鼠下颌骨中釉质基质蛋白(EMP)的相对表达水平,进一步寻找TAK1在牙齿发育作用中的靶蛋白。从组织学水平及mRNA表达水平来研究TAK1对釉质形态及釉质基质蛋白表达水平的影响,从而为研究TAK1在牙釉质形成中的作用机制奠定基础。方法：克隆小鼠釉原蛋白(Amelogenin, Amelx)启动子及人TAK1的全长基因,并分别利用缺失突变和点突变原理扩增caTAK1基因和dnTAK1基因。运用Gateway技术分别将活化型TAK1和失活型TAK1基因插入Amelx启动子下游构建转基因表达载体,通过显微注射法建立TAK1转基因FVB小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,RT-PCR检测外源性TAK1基因表达。分别运用体视显微镜、X光片、微型CT观察转基因小鼠磨牙釉质的矿化程度和病理性磨损程度。最后,运用实时定量PCR的方法检测FVB野生型小鼠与TAK1转基因小鼠下颌骨中Amelx, Ambn, Mmp-20,Klk4及Alp基因mRNA相对表达量的变化。结果：克隆了小鼠Amelx启动子基因及人TAK1基因,并构建了不同活性TAK1重组表达质粒。成功构建caTAK1和dnTAK1转基因表达载体,制备了不同活性TAK1转基因小鼠,并证明转入的人不同活性TAK1基因在小鼠颌骨组织中特异性表达。组织学分析：体视显微镜观察结果显示活化型小鼠的磨牙釉质色泽略显暗淡,出生6个月磨牙合面即发生严重磨损；而失活型小鼠磨牙釉质与野生型小鼠无明显区别。Micro X-ray及Micro CT结果显示：活化型TAKl转基因小鼠出生6个月即发生明显的磨牙合面釉质磨损。实时定量PCR结果显示：与野生型FVB小鼠相比,活化型TAK1转基因小鼠下颌骨中釉质基质蛋白Amelx, Ambn, Mmp-20, Klk4及Alp基因mRNA的相对表达量均增加。其中以Amelx和Ambn表达量的增加最为显著。结论：TAK1显著上调Amelx和Ambn的表达量,使釉质蛋白在釉质中含量明显增加,影响了牙釉质矿化程度而导致牙釉质发育不良,容易产生病理性磨损。
【关键词】：TGF-β激活激酶-1(TAK1) 基因突变 转基因动物 釉质发育 釉质基质蛋白
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R781;R-332

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本文编号：298843