人类内源性逆转录病毒W家族env基因在神经细胞中过表达致KCNN3通道开放及TLR通路活化机制研究
发布时间：2021-02-04 08:31
目的：HERV可能会导致精神分裂症的发生发展。在本研究中,运用分子生物学和电生理的方法,我们将探讨HERV-W env基因在精神分裂症发病机制中的作用。方法：荧光显微镜观察ENV蛋白在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的细胞定位。在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y和IMR32中过表达env基因,运用半定量RT-PCR和Real-time PCR检测小电导钙激活钾通道超家族N成员3（small conductance calcium-activated channel, subfamily N, member3, KCNN3）和S100钙结合蛋白B （S100calcium-binding protein B, S100B） mRNA表达水平；运用Western-blot检测KCNN3基因蛋白表达水平：使用萤光素酶系统检测目的基因启动子活性；通过基因干扰实验分别下调cAMP反应原件结合蛋白（cAMP-response element-binding protein, CREB）的表达,以证明CREB在env激活基因表达中的作用；运用全细胞膜片钳技术记录KCNN3通道电流；钙离子结合染...
【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
进化树分析丨丨ERV-W的分类与分布
Fig 1.3 Schematic drawing of the HERV-W ENV glycoprotein (Mallet F，Proc Natl Acad SciA. 2004 Feb 10;101(6):1731-6.)胞外段蛋白（surface protein. SU );跨膜段蛋白（transmembprotein，TM )；融合肽段（fusion peptide, fp )；免疫抑制区域（immunosuppressive region，校基跨膜区域（carboxy-transmembrane region, TR )HERV-W属于Y逆转录病毒家族，分布于人类基因组的多条染色体根据其序列的相似程度可以分为三个亚家族，其中定位于7号染色HERV-Wenv基因（图1.2)能够编码完整的胞膜糖蛋白又称为合胞素。基因进化相对保守，能够介导逆转录病毒的细胞内融合以及促使许多细胞内胎盘合胞体滋养层细胞的融合[15]。在所有的HERV屮，ENV白的前体在帘主细胞的蛋白酶的作用下可以剪切成胞外段（surface uSU )和跨膜段（trans-membrane, TM )两个业基（图1.3) [16],这两'基随后定位于宿主细胞表面特异性受体结合位点形成异二聚体。很多录病毒的env糖蛋白的TM段都其有一个保守的免疫抑制结(immunosuppressive region, ir)(图1.3)。ir与选择性宿主免疫抑制相胎盘表达的HERV-W env-TM亚基可能在人的母婴W障的免疫调节中
妈离子在细胞的联系中起着中心的地位[82]，调控着很多通路及途径的活化过程（图2.1)。它与许多神经退行性疾病都具有相关性，如精神分裂症，癫痫症和阿尔茨海默病等183-85]。早期的研究已经证实在精神分裂症病人的脑脊液中有升高的韩离子水平[86-88]。而在纹状体神经元细胞，妈离了?内流导致激活蛋白激酶 C (protein kinase C, PKC),导致细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulatedprotein kinases, ERK)通路的活化引起CREB的憐酸化入核等事件的发生[89]。而本实验前期实验证实，HERV-Wenv也能够引起CREB憐酸化入核增加，进而导致下游一些与精神分裂症相关的基因如BDNF和多巴胺D3受体(dopamine D3receptor, DRD3)的表达上调[1 ]。 .. -,?-嫩-.?. .、 ptwww 、、Membrane JAK、 j ''[ *, \ II ■ T \ PKC hI\ I \ 八響 /、、、 CTAT * MEK /\ STAT? i ' ,\ ,；■。■: -- J. 丨 y'、、 ； /Nucleas—V. /...C-fos niRIsA图2.1料离子调控相关途径Fig 2.1 Diagram showing calcium mediated pathwayN-甲基 D-门冬氨酸受体（N-methyl D-aspartate receptor，NMDAR )；辟脂酶 C ( phospho丨ipaseC, PLC); 4丐离子/4*5调素依赖性蛋白激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinases，CaMK )； cAMP 依赖蛋白激醉 A ( protein kinase A，PKA )；蛋白激梅 C ( protein kinase C
本文编号：3018038
【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
进化树分析丨丨ERV-W的分类与分布
Fig 1.3 Schematic drawing of the HERV-W ENV glycoprotein (Mallet F，Proc Natl Acad SciA. 2004 Feb 10;101(6):1731-6.)胞外段蛋白（surface protein. SU );跨膜段蛋白（transmembprotein，TM )；融合肽段（fusion peptide, fp )；免疫抑制区域（immunosuppressive region，校基跨膜区域（carboxy-transmembrane region, TR )HERV-W属于Y逆转录病毒家族，分布于人类基因组的多条染色体根据其序列的相似程度可以分为三个亚家族，其中定位于7号染色HERV-Wenv基因（图1.2)能够编码完整的胞膜糖蛋白又称为合胞素。基因进化相对保守，能够介导逆转录病毒的细胞内融合以及促使许多细胞内胎盘合胞体滋养层细胞的融合[15]。在所有的HERV屮，ENV白的前体在帘主细胞的蛋白酶的作用下可以剪切成胞外段（surface uSU )和跨膜段（trans-membrane, TM )两个业基（图1.3) [16],这两'基随后定位于宿主细胞表面特异性受体结合位点形成异二聚体。很多录病毒的env糖蛋白的TM段都其有一个保守的免疫抑制结(immunosuppressive region, ir)(图1.3)。ir与选择性宿主免疫抑制相胎盘表达的HERV-W env-TM亚基可能在人的母婴W障的免疫调节中
妈离子在细胞的联系中起着中心的地位[82]，调控着很多通路及途径的活化过程（图2.1)。它与许多神经退行性疾病都具有相关性，如精神分裂症，癫痫症和阿尔茨海默病等183-85]。早期的研究已经证实在精神分裂症病人的脑脊液中有升高的韩离子水平[86-88]。而在纹状体神经元细胞，妈离了?内流导致激活蛋白激酶 C (protein kinase C, PKC),导致细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulatedprotein kinases, ERK)通路的活化引起CREB的憐酸化入核等事件的发生[89]。而本实验前期实验证实，HERV-Wenv也能够引起CREB憐酸化入核增加，进而导致下游一些与精神分裂症相关的基因如BDNF和多巴胺D3受体(dopamine D3receptor, DRD3)的表达上调[1 ]。 .. -,?-嫩-.?. .、 ptwww 、、Membrane JAK、 j ''[ *, \ II ■ T \ PKC hI\ I \ 八響 /、、、 CTAT * MEK /\ STAT? i ' ,\ ,；■。■: -- J. 丨 y'、、 ； /Nucleas—V. /...C-fos niRIsA图2.1料离子调控相关途径Fig 2.1 Diagram showing calcium mediated pathwayN-甲基 D-门冬氨酸受体（N-methyl D-aspartate receptor，NMDAR )；辟脂酶 C ( phospho丨ipaseC, PLC); 4丐离子/4*5调素依赖性蛋白激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinases，CaMK )； cAMP 依赖蛋白激醉 A ( protein kinase A，PKA )；蛋白激梅 C ( protein kinase C
本文编号：3018038
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