FGFs/FGFR3与1,25（OH） 2 D 3 /VDR信号通路的交互作用及其在软骨发育中的作用及意义研究
发布时间：2021-02-06 19:19
骨骼是人体重要的组织器官，是机体机械运动的基础。近年的研究发现，骨骼系统参与了生理及病理条件下机体代谢、内分泌和造血功能的调控。良好的骨骼发育是机体健康的基础，骨骼发育具体机制的深入探索对寻找骨骼疾病新的治疗措施与方案具有重要意义。骨骼发育包括软骨内成骨和膜内成骨两种途径，是一个高度有序、受到多种因素共同调控的过程。软骨内成骨是哺乳动物骨骼形成的主要途径。成纤维细胞生长因子（Fibroblast growth factors，FGFs）及其受体成纤维细胞生长因子受体（Fibroblast growthfactor receptors，FGFRｓ）在调节软骨内成骨中发挥重要的作用。FGFR3属于酪氨酸激酶受体家族，其基因突变与多种骨骼发育性疾病密切相关。通过对FGFR3基因工程小鼠的深入研究表明，FGFR3在骨骼发育调控中发挥重要作用。模拟人软骨发育不全的FGFR3功能增强型（gain-of function）点突变小鼠模型（FGFR3G369C/+小鼠，即ACH小鼠）表现为身材短小，长骨生长板结构紊乱，软骨细胞增殖速度减慢。ACH小鼠软骨细胞的分化受到抑制，表现为肥大软骨细胞数量减少，...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
COS-7细胞内pRK7-FGFR3与EGFP-VDR的共定位激光共聚焦显镜图像，其中红色代表pRK7-FGFR3，绿色代表EGFP-VDR，蓝色代表DAPI核染色，两种色彩叠加后橙黄色的信号即为共定位信号
第三军医大学硕士学位论文）COS-7 细胞内 YFP1-VDR 与 YFP2-FGFR3 的共定位实验的原理是[1]将 YFP 蛋白分为两个部分（即 YFP1 和 YFP2），各自分别究的分子，单独的 YFP 亚基不会发光，当两种分子存在直接相互作用，在靠近时，可以使 YFP1 和 YFP2 两个亚单位重新结合成完整的 YFP 蛋白，光。若两种分子无相互作用，则无荧光出现。在 COS-7 细胞内分别单独-VDR、YFP2-FGFR3 作为阴性对照，实验组共转染 YFP1-VDR 与 YFP2-FG表达载体由本实验室前期构建）；阳性对照组采用 Cao 等[2]的方案，即共-TGFβR2 和 YFP2-PTH1R（转染 24h 后 10-8M PTH 处理 5min），转染 24h 后行共聚焦显微镜检测，结果（图 2）提示：阴性对照组（图 2A）无荧光信性对照组（图 2B）出现绿色荧光，与文献报道相一致[2]，实验组（图 2C）C出现绿色荧光，提示 FGFR3 与 VDR 存在内源性的共定位，共定位的位置。
第三军医大学硕士学位论文2.3.1.2 FGFR3 与 VDR 在软骨细胞内存在直接的相互作用FGFR3 与 VDR 在空间位置存在共定位为二者的相互作用提供了结构基础，然们利用免疫共沉淀技术进一步研究 FGFR3 与 VDR 之间是否存在直接的相互作用果发现，在 ATDC5 细胞中，利用 FGFR3 特异的抗体可将 VDR 蛋白沉淀下来，组 IgG 不能将 VDR 特异性的沉淀下来（图 3A）；在另外的试验中，利用 VDR 的可将 FGFR3 蛋白特异性的沉淀下来（图 3B）。该结果说明 FGFR3 与 VDR 存在性的直接相互作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大剂量1,25二羟维生素D3对发育期小鼠骨稳态的影响[J]. 黄启钊,戚华兵,王晓凤,朱莹,王权,王先行,杜晓兰,陈林. 第三军医大学学报. 2014(08)
[2]骨钙素介导的骨内分泌系统[J]. 王春玉,龙丰云,陈香,余希杰. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2013(03)
[3]构建FGFR3基因沉默慢病毒载体及其对ATDC5细胞增殖和分化的影响[J]. 朱莹,戚华兵,王权,王晓凤,黄启钊,陈林. 第三军医大学学报. 2013(11)
[4]维生素D缺乏与骨质疏松[J]. 夏维波,苏华,周学瀛. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2009(03)
[5]软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析[J]. 雷子贤,戚华兵,苏楠,赵子瑜,陈锚锚,何启芬,赵玲,金旻,谢杨丽,李福兵,杜晓兰,陈林. 中国骨质疏松杂志. 2009(01)
[6]FGFR3在骨骼发育和疾病中作用的研究进展[J]. 苏楠,陈林. 国际遗传学杂志. 2006(03)
本文编号：3020961
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
COS-7细胞内pRK7-FGFR3与EGFP-VDR的共定位激光共聚焦显镜图像，其中红色代表pRK7-FGFR3，绿色代表EGFP-VDR，蓝色代表DAPI核染色，两种色彩叠加后橙黄色的信号即为共定位信号
第三军医大学硕士学位论文）COS-7 细胞内 YFP1-VDR 与 YFP2-FGFR3 的共定位实验的原理是[1]将 YFP 蛋白分为两个部分（即 YFP1 和 YFP2），各自分别究的分子，单独的 YFP 亚基不会发光，当两种分子存在直接相互作用，在靠近时，可以使 YFP1 和 YFP2 两个亚单位重新结合成完整的 YFP 蛋白，光。若两种分子无相互作用，则无荧光出现。在 COS-7 细胞内分别单独-VDR、YFP2-FGFR3 作为阴性对照，实验组共转染 YFP1-VDR 与 YFP2-FG表达载体由本实验室前期构建）；阳性对照组采用 Cao 等[2]的方案，即共-TGFβR2 和 YFP2-PTH1R（转染 24h 后 10-8M PTH 处理 5min），转染 24h 后行共聚焦显微镜检测，结果（图 2）提示：阴性对照组（图 2A）无荧光信性对照组（图 2B）出现绿色荧光，与文献报道相一致[2]，实验组（图 2C）C出现绿色荧光，提示 FGFR3 与 VDR 存在内源性的共定位，共定位的位置。
第三军医大学硕士学位论文2.3.1.2 FGFR3 与 VDR 在软骨细胞内存在直接的相互作用FGFR3 与 VDR 在空间位置存在共定位为二者的相互作用提供了结构基础，然们利用免疫共沉淀技术进一步研究 FGFR3 与 VDR 之间是否存在直接的相互作用果发现，在 ATDC5 细胞中，利用 FGFR3 特异的抗体可将 VDR 蛋白沉淀下来，组 IgG 不能将 VDR 特异性的沉淀下来（图 3A）；在另外的试验中，利用 VDR 的可将 FGFR3 蛋白特异性的沉淀下来（图 3B）。该结果说明 FGFR3 与 VDR 存在性的直接相互作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大剂量1,25二羟维生素D3对发育期小鼠骨稳态的影响[J]. 黄启钊,戚华兵,王晓凤,朱莹,王权,王先行,杜晓兰,陈林. 第三军医大学学报. 2014(08)
[2]骨钙素介导的骨内分泌系统[J]. 王春玉,龙丰云,陈香,余希杰. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2013(03)
[3]构建FGFR3基因沉默慢病毒载体及其对ATDC5细胞增殖和分化的影响[J]. 朱莹,戚华兵,王权,王晓凤,黄启钊,陈林. 第三军医大学学报. 2013(11)
[4]维生素D缺乏与骨质疏松[J]. 夏维波,苏华,周学瀛. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2009(03)
[5]软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析[J]. 雷子贤,戚华兵,苏楠,赵子瑜,陈锚锚,何启芬,赵玲,金旻,谢杨丽,李福兵,杜晓兰,陈林. 中国骨质疏松杂志. 2009(01)
[6]FGFR3在骨骼发育和疾病中作用的研究进展[J]. 苏楠,陈林. 国际遗传学杂志. 2006(03)
本文编号：3020961
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