RNR3启动子调控的红绿荧光蛋白双信号发光酵母细胞对化学诱变原的筛选

发布时间：2021-02-07 02:11

　　目的:构建RNR3启动子调控的红绿荧光蛋白双信号发光酵母细胞,用于快速筛选化学诱变原。方法:用PCR方法YIPlac204TC-NLS-DsRed-Express-2扩增DsRed-Express-2红色荧光蛋白,将其插入到pGPD载体,构建成GPD启动子驱动的红色荧光蛋白酵母报告载体（pGPD-DsRed-Express2）,用醋酸锂方法将其转化于RNR3启动子调控的绿色荧光蛋白（yEGFP）发光酵母细胞（W303-1A/RNR3-yEGFP）,从而构建成红、绿荧光蛋白双信发光酵母细胞。红色荧光蛋白（DsRed-Express-2）信号可用于校正细胞数和状态不同对yEGFP发光的影响。用不同诱变原分别作用于该发光酵母细胞,于第0、4、8、12、16和20小时,用黑色96孔酶标板分别测红、绿荧光蛋白的发光强度,用相对荧光强度（yEGFP/DsRed-Express2）描述诱变原的剂量效应关系。结果:在与DNA发生结合的化合物中,放线菌素D和溴乙锭均呈阴性;在与DNA发生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂（MMS）和瘤可宁呈阳性结果,而丝裂霉素C呈阴性结果;在使DNA发生断裂的诱变原中,顺铂、... 

【文章来源】：癌变·畸变·突变. 2019,31(04)

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂和仪器
    1.2 RNR3启动子调控的绿荧光蛋白双信号发光酵母细胞的建立
    1.3 RNR3调控的双信号发光酵母细胞对诱变原的筛选研究
    1.4 统计方法
2 结果
    2.1 yEGFP和DsRed-Express-2发光效果
    2.2 双发光重组酵母细胞对与DNA发生结合诱变原的筛选
    2.3 双发光重组酵母细胞对使DNA发生烷基化诱变原的筛选
    2.4 双发光重组酵母细胞对使DNA发生断裂诱变原的筛选
    2.5 双发光重组酵母细胞对抑制DNA合成酶或拓扑异构酶诱变原的筛选
    2.6 双发光重组酵母细胞对其他生物化学毒性作用化合物的筛选
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]RNR3调控的重组绿色荧光蛋白酵母细胞对化学诱变原的高通量筛选[J]. 王磊,罗方妮,谢云斌,刘星妍,王正英,王小伟,李华玲,李湘鸣.  毒理学杂志. 2013(04)
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本文编号：3021470