Bcl-3对HTLV-1感染细胞生长的影响及其作用机制

发布时间：2017-04-13 04:28

  本文关键词：Bcl-3对HTLV-1感染细胞生长的影响及其作用机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景人类T细胞白血病1型病毒(HTLV-1)是一种感染CD4+、细胞和树突状细胞的逆转录病毒,它是成人T细胞白血病(ATL)的病原体。HTLV-1的病毒蛋白Tax能够利用多种细胞机制和信号途径调节细胞性状转化和病毒复制,其中,Tax诱导NF-κB通路的持续激活被认为是导致ATL的主要原因。Bcl-3是IκB家族中的分子,它能够促进或抑制NF-κB依赖的基因的转录；在很多HTLV-1感染细胞系和ATL细胞中均发现Bcl-3表达量增高,但Bcl-3在HTLV-1致病过程中的作用机制仍不明确。 目的研究在HTLV-1感染的细胞中沉默Bcl-3对细胞生长增殖,DNA损伤以及NF-κB活性的影响。 方法 1.RT-PCR与Western blot:培养MT2、Jurkat、IM9、THP-1、MT4五种细胞系,检测Bcl-3mRNA与蛋白质的表达量；在MT2细胞中转染Bcl-3shRNA,检测Bcl-3mRNA与蛋白质的表达情况； 2.免疫荧光检测：分别在Tax转染的Jurkat细胞系以及持续表达Tax的TaxP细胞系中观察Bcl-3与P65的核转位情况； 3.彗星实验：在MT2细胞中转染Bcl-3shRNA,检测其对细胞DNA损伤的影响； 4.MTT检测：在MT2细胞中转染Bcl-3shRNA质粒,检测其对细胞生长的影响； 5.荧光素酶活性检测：将pNF-κB-luc质粒与Bcl-3shRNA质粒共转染[axN与TaxP细胞,观察沉默Bcl-3对NF-κB活性的影响。结果 1.实时定量PCR和Western blot检测发现Bcl-3的mRNA及蛋白表达量在HTLV-1感染的细胞系高于HTLV-1未感染的细胞系； 2.免疫荧光发现在Tax持续表达的TaxP细胞中能观察到P65的核转移； 3.免疫荧光发现在转染Tax的Jurkat细胞中能观察到Bcl-3表达及核转移的增加； 4.实时定量PCR和Western blot检测发现在MT2细胞中,Bcl-3shRNA能够在mRNA水平及蛋白水平显著抑制Bcl-3表达； 5.MTT法检测到在HTLV-1感染的细胞系转染Bcl-3shRNA能够抑制细胞生长； 6.彗星实验检测到在HTLV-1感染的细胞系转染Bcl-3shRNA能够引起细胞DNA损伤； 7.荧光素酶报告检测法检测到在HTLV-1感染的细胞系转染Bcl-3shRNA能够抑制NF-κB的活性。 结论 在HTLV-1感染细胞中沉默Bcl-3可抑制细胞生长、诱导DNA损伤。
【关键词】：HTLV-1 Bcl-3 DNA损伤 NF-κB激活
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 1 实验材料12-15
• 2 实验方法15-25
• 3 实验结果25-27
• 4 讨论27-29
• 小结29-30
• 附图30-34
• 参考文献34-38
• 综述38-47
• 参考文献43-47
• 附录47-48
• 攻读学位期间发表文章情况48-49
• 致谢49-50
• 个人简历50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Ruaidhrí J. Carmody;;Nuclear Factor-κB:Activation and Regulation during Toll-Like Receptor Signaling[J];Cellular & Molecular Immunology;2007年01期

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本文编号：302823