胰岛素样生长因子Ⅰ转染对脂肪干细胞TWEAK/Fn14信号通路的影响

发布时间：2021-03-07 09:34

　　背景:胰岛素样生长因子Ⅰ具有诱导间充质干细胞向软骨细胞分化的能力,通过基因转染的方式将胰岛素生长因子Ⅰ转染入脂肪干细胞或许能够更好的促进脂肪干细胞向软骨细胞分化。目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅰ基因对脂肪间充质干细胞体外定向成软骨分化能力以及对TWEAK/Fn14信号通路的影响。方法:构建慢病毒载体p LVX-IGF-I-IRES-Zs Greenl基因并转染第3代人脂肪间充质干细胞,诱导细胞向软骨分化。同时将pL VX-IRES-Zs Greenl转染的脂肪间充质干细胞设为绿色荧光蛋白/脂肪间充质干细胞组,单纯脂肪间充质干细胞设为对照组。结果与结论:与绿色荧光蛋白/脂肪间充质干细胞组和对照组相比,胰岛素样生长因子Ⅰ/脂肪间充质干细胞组细胞中TWEAK mR NA表达水平降低,而胰岛素样生长因子Ⅰ,Col2al和Sox9 mR NA的表达水平增加,Col2a1表达水平增加,基质金属蛋白酶3以及TWEAK的表达降低。提示pL VX-IGF-I-IRES-ZsG reenl慢病毒转染脂肪间充质干细胞后可获得胰岛素样生长因子Ⅰ的高效表达,且能下调细胞TWEAK基因及蛋白表达,可促进体外培养的脂肪... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2015,19(45)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
0 引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1设计
    1.2时间及地点
    1.3 材料
    1.4 方法
        1.4.1 p LVX-IGF-I-IRES-Zs Greenl的构建与鉴定
        1.4.2含胰岛素样生长因子Ⅰ基因表达的慢病毒载体的包装与病毒滴度的测定
        1.4.3 p LVX-IGF-I-IRES-Zs Greenl转染人脂肪间充质干细胞
        1.4.4脂肪间充质干细胞的诱导分化
        1.4.5甲苯胺蓝和阿尔新蓝染色
        1.4.6免疫细胞化学染色
        1.4.7反转录PCR
        1.4.8 Western-blot检测
        1.4.9生长曲线
    1.5结局观察指标
    1.6统计学分析
2 结果Results
    2.1 p LVX-IGF-I-IRES-Zs Greenl的鉴定结果
    2.2 p LVX-IGF-I-IRES-Zs Greenl的转染效率
    2.3胰岛素样生长因子Ⅰ转染的脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化
    2.4Ⅱ型胶原的表达
    2.5胰岛素样生长因子Ⅰ,Ⅱ型胶原（Col2a1）,Sox9和TWEAK m RNA的表达
    2.6 Col2a1,基质金属蛋白酶3及TWEAK的表达
    2.7生长曲线
3 讨论Discussion
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【参考文献】：
期刊论文
[1]人髌下脂肪垫来源脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定[J]. 刘玉平,刘涛,王明明,李明,俞光荣.  中国组织工程研究. 2015(41)
[2]TWEAK诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞合成MMP-3的实验研究[J]. 夏丽萍,肖卫国,李俊松,丁爽,鲁静.  细胞与分子免疫学杂志. 2009(01)



本文编号：3068831