一个新的膜联蛋白亚家族—AnxB1的鉴定及其抗凝血功能的研究

发布时间：2021-03-23 09:15

　　cC1是孙树汉教授利用免疫筛选的方法，从猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）cDNA文库中分离到的一个抗原基因。大量的研究证明，cC1不仅是一个重要的保护性抗原，而且可能参与了囊尾蚴细胞丝裂原信号传导途径，对于细胞的生长、分化具有重要的生理意义。为进一步探讨cC1的生理功能，首先利用生物信息学（bioinformatics）软件对cC1进行了序列分析、二、三级结构预测和基本理化特性预测。通过核酸水平和氨基酸水平的相似性搜索，发现cC1同膜联蛋白家族（Annexin family）成员的序列相似性达到了40～60％。一般认为，当两个基因的序列相似性大于30％，那么这两个基因就可能是同源基因。因此，cC1可能同Annexin基因同源；进一步利用多个蛋白质结构域数据库进行分析，发现cC1氨基酸序列中具有四个典型的Annexin重复区域。每个重复区域由70～100个氨基酸残基组成，包含一个"M-K／R-G-X-G-T-（38residues）-D／E”的基序；对cC1的二级结构进行预测，发现该蛋白以α-螺旋为主，占氨基酸总数的57.8％。基本没有β-折叠出现；利用同源建模（... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
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缩略词表
前言
研究内容
第一部分 抗原基因cC1的生物信息学分析及其结构与功能预测
    一、 摘要
    二、 引言
    三、 方法
    四、 结果
        2.1 基因序列分析
            2.1.1 序列相似性检索与分析
            2.1.2 蛋白质结构域分析
        2.2 cC1的结构和理化特性分析
            2.2.1 cC1的二级结构预测
            2.2.2 同源建模预测cC1的三维结构
            2.2.3 基本理化特性分析
        2.3 分子进化
    五、 讨论
第二部分 一个新的Annexin亚家族—AnxB1的鉴定及其生理功能研究
    一、 摘要
    二、 引言
    三、 方法
    四、 结果
        1、 AnxB1的序列分析及结构特征
2+依赖性磷脂结合活性">        2、 GST-AnxB1具有Ca²⁺依赖性磷脂结合活性
        3、 AnxB1是阶段特异性表达的基因
        4、 GST-AnxB1具有较强的抗凝血活性
    五、 讨论
第三部分 同源建模法构建AnxB1序列缺失突变体及其抗凝血活性分析
    一、 摘要
    二、 引言
    三、 方法
    四、 结果
        1、 利用同源建模法构建Anx32序列缺失突变体
        2、 突变体蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化
        3、 突变体GST-M3，GST-M4保留较强的抗凝血活性
        4、 GST-M3，GST-M4的免疫原性降低
    五、 讨论
第四部分 导向溶栓剂AnxB1-ScuPA的基因构建、表达及其活性分析
    一、 摘要
    二、 引言
    三、 方法
    四、 结果
        1、 原核表达质粒pET28a-anxB1ScuPA和pET28a-ScuPAanxB1的构建
        2、 融合蛋白AnxB1-ScuPA和ScuPA-AnxB1的表达和初步纯化
        3、 融合蛋白AnxB1-ScuPA和ScuPA-AnxB1的溶栓活性比较
    五、 讨论
小结
文献综述—膜联蛋白的结构与功能
附录： 攻读博士期间发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应[J]. 吴丹,郭瀛军,林懿,孙树汉.  第二军医大学学报. 2000(06)



本文编号：3095558