小鼠骨骼肌细胞离体胰岛素抵抗模型的建立和验证

发布时间：2021-04-04 03:47

　　目的:建立稳定可重复的骨骼肌细胞离体胰岛素抵抗模型,促进胰岛素抵抗病理机制的探索及药物的研发与筛选。方法:采用小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12为研究对象,分别以正常分化液及含40和60 mmol/L葡萄糖的分化液诱导分化,每天用相差显微镜观察不同浓度葡萄糖处理对细胞汇聚、融合和形成多核肌管的影响;分别在分化1、3、5和7 d后应用2-NBDG法检测不同处理对细胞基础糖摄取和胰岛素刺激糖摄取的影响;在分化5 d和7 d后应用Western blot法检测不同干预对葡萄糖转运子4（glucose transporter 4,GLUT4）蛋白表达的影响;分化5 d后应用免疫荧光组化法检测不同干预对GLUT4蛋白分布的影响。结果:形态学结果显示,经60 mmol/L葡萄糖（高糖）处理3 d后明显抑制C2C12细胞的生长分化;葡萄糖摄取结果表明高糖处理5 d和7 d后均明显抑制C2C12的基础糖摄取和胰岛素刺激的糖摄取（P<0.01）,且处理5 d后胰岛素刺激的糖摄取与基础糖摄取的差异无统计学显著性（P>0.05）; Western blot检测结果表明高糖处理5 d和7 d后,胰岛素刺... 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2019,35(09)北大核心CSCD

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【部分图文】：

＊＊P＜0．01vsPBSgroup;

0.01)，见图4。以上结果提示高糖干预5d明显降低C2C12细胞膜GLUT4表达量，且存在剂量依赖性，以60mmol/L葡萄糖干预抑制效果最明显，说明60mmol/L葡萄糖干预不仅导致细胞中GLUT4蛋白表达降低，同时抑制GLUT4蛋白向细胞膜的转运，抑制C2C12细胞葡萄糖的摄取。Figure2．ThechangesofglucoseuptakeintheC2C12cellstreatedwithglucoseatdifferentconcentrations．Mean±SD．n=6．*P＜0．05，＊＊P＜0．01vsPBSgroup;##P＜0．01vscontrolgroup．图2不同浓度葡萄糖干预不同时长对C2C12细胞葡萄糖摄取能力的影响Figure3．ThechangesofGLUT4proteinexpressionintheC2C12cellstreatedwithglucoseatdifferentconcentrationsfor5d(A)and7d(B)respectively．Mean±SD．n=6．*P＜0．05，＊＊P＜0．01vsPBSgroup．图3不同浓度葡萄糖干预不同时长对C2C12细胞GLUT4蛋白表达的影响·5271·

【参考文献】：
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本文编号：3117669