可用于IDO1抑制剂药效学研究的KPIC原位胰腺癌小鼠模型的构建
发布时间：2021-04-05 02:37
目的构建KPIC原位胰腺癌小鼠模型用于吲哚胺2,3-双加氧酶1（indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1）抑制剂药效学研究。方法采用实时定量荧光PCR和Western blot等方法鉴定KPIC细胞中IDO1的表达情况;使用HPLC检测IDO1抑制剂1-甲基-L-色氨酸（1-methyl-L-tryptophan,1-L-MT）对KPIC细胞中IDO1活性的抑制作用及KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性;接种KPIC细胞到小鼠胰腺构建KPIC原位胰腺癌小鼠;免疫组化法检测KPIC原位胰腺癌小鼠肿瘤中IDO1、肿瘤增殖指数Ki67、胆系标志物Sox9的表达。结果经mRNA及蛋白质水平鉴定,KPIC细胞内有IDO1及其同工酶的表达;1-L-MT能够下调KPIC细胞中IDO1活性;KPIC原位胰腺癌小鼠构建成功,在原位肿瘤中IDO1、Ki67和Sox9均有表达,小鼠血清中IDO1活性上调。结论 KPIC原位胰腺癌小鼠表达IDO1,可用于IDO1抑制剂的筛选及药效学评价。
【文章来源】：复旦学报(医学版). 2019,46(05)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
KPIC细胞中IDO1及其同工酶的表达A:mＲNAlevelsmeasuredbyreal-timeqPCＲ;B:ProteinlevelsmeasuredbyWesternblot．
yn/Trp比值均恢复到对照组的水平(表2)。实验结果表明，1-L-MT不仅可以下调KPIC细胞本底的IDO1活性，还可以逆转异常上调的IDO1活性。KPIC细胞可用于后续IDO1抑制剂药效学研究动物模型的构建。A-C:KPICcellsweretreatedwith1-L-MT(50or100μmol/L，24h);D-F:KPICcellswerepretreatedwithIFN-γ(100ng/mL，24h)，thentreatedwith1-L-MT(100μmol/L，24h)．Ｒesultswereexpressedasx－±sfrom3independentexperiments．(1)P＜0．05．图3HPLC检测1-L-MT对KPIC细胞中IDO1活性的抑制作用Fig3Inhibitoryeffectof1-L-MTonIDO1activityinKPICcellsdeterminatedbyHPLC表2KPIC细胞上清中Trp和Kyn含量及比值Tab2ConcentrationsofTrpandKynandtheratioofKyn/TrpinthesupernatantofKPICcellsIndexGroup1Group2ABCABCTrp(μmol/L)21．68±0．6020．25±0．9819．98±0．6624．05±2．3120．53±0．3523．48±1．14Kyn(μmol/L)0．30±0．080．15±0．040．13±0．010．21±0．040．31±0．050．20±0．03(Kyn/Trp)×1001．40±0．410．73±0．140．65±0．061．05±0．241．51±0．210．86±0．15Group1A:KPICcells;Group1B:KPICcellstreatedwith50μmol/L1-L-MTfor24h;Group1C:KPICcellstreatedwith100μmol/L1-L-MTfor24h;Group2A:KPICcells;Group2B:KPICcellstreatedwith100ng/mLIFN-γfor24h;Group2C:KPICcellspretreatedwith100ng/mLIFN-γfor24h，thentreatedwith100μmol/L1-MTfor24h．KPIC原位胰腺癌小鼠模型构建选取5只6～8周雌性C57BL/6小鼠，将
)。与野生型C57小鼠相比(表3)，KPIC原位胰腺癌小鼠的Trp含量较低(图5A，P=0．0006)，而Kyn含量较高(P=0．0212，图5B)，接受手术的KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性显著升高(P=0．0285，图5C)。SerumofKPICorthotopicpancreaticcancermice(n=5)andwildtypemice(n=5)werecollectedonday20aftertumorimplantation．Ｒesultswereexpressedasx－±sfrom3independentexperiments．(1)P＜0．05，(2)P＜0．001．WT:Wildtype．图5KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性Fig5SerumIDO1activityofKPICorthotopicpancreaticcancermice185
本文编号：3118971
【文章来源】：复旦学报(医学版). 2019,46(05)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
KPIC细胞中IDO1及其同工酶的表达A:mＲNAlevelsmeasuredbyreal-timeqPCＲ;B:ProteinlevelsmeasuredbyWesternblot．
yn/Trp比值均恢复到对照组的水平(表2)。实验结果表明，1-L-MT不仅可以下调KPIC细胞本底的IDO1活性，还可以逆转异常上调的IDO1活性。KPIC细胞可用于后续IDO1抑制剂药效学研究动物模型的构建。A-C:KPICcellsweretreatedwith1-L-MT(50or100μmol/L，24h);D-F:KPICcellswerepretreatedwithIFN-γ(100ng/mL，24h)，thentreatedwith1-L-MT(100μmol/L，24h)．Ｒesultswereexpressedasx－±sfrom3independentexperiments．(1)P＜0．05．图3HPLC检测1-L-MT对KPIC细胞中IDO1活性的抑制作用Fig3Inhibitoryeffectof1-L-MTonIDO1activityinKPICcellsdeterminatedbyHPLC表2KPIC细胞上清中Trp和Kyn含量及比值Tab2ConcentrationsofTrpandKynandtheratioofKyn/TrpinthesupernatantofKPICcellsIndexGroup1Group2ABCABCTrp(μmol/L)21．68±0．6020．25±0．9819．98±0．6624．05±2．3120．53±0．3523．48±1．14Kyn(μmol/L)0．30±0．080．15±0．040．13±0．010．21±0．040．31±0．050．20±0．03(Kyn/Trp)×1001．40±0．410．73±0．140．65±0．061．05±0．241．51±0．210．86±0．15Group1A:KPICcells;Group1B:KPICcellstreatedwith50μmol/L1-L-MTfor24h;Group1C:KPICcellstreatedwith100μmol/L1-L-MTfor24h;Group2A:KPICcells;Group2B:KPICcellstreatedwith100ng/mLIFN-γfor24h;Group2C:KPICcellspretreatedwith100ng/mLIFN-γfor24h，thentreatedwith100μmol/L1-MTfor24h．KPIC原位胰腺癌小鼠模型构建选取5只6～8周雌性C57BL/6小鼠，将
)。与野生型C57小鼠相比(表3)，KPIC原位胰腺癌小鼠的Trp含量较低(图5A，P=0．0006)，而Kyn含量较高(P=0．0212，图5B)，接受手术的KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性显著升高(P=0．0285，图5C)。SerumofKPICorthotopicpancreaticcancermice(n=5)andwildtypemice(n=5)werecollectedonday20aftertumorimplantation．Ｒesultswereexpressedasx－±sfrom3independentexperiments．(1)P＜0．05，(2)P＜0．001．WT:Wildtype．图5KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性Fig5SerumIDO1activityofKPICorthotopicpancreaticcancermice185
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